【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程。更具体地，涉及一株弓形虫三基因敲除疫苗虫株及其应用。
技术介绍
1、弓形虫病是由顶复门原虫弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病，严重危害人类健康及畜牧业可持续发展。健康人群或动物感染弓形虫后表现为无症状或仅出现轻微的临床症状，但免疫低下或缺陷的人群与动物感染弓形虫后会导致严重后果，甚至危及生命。弓形虫可侵害机体眼部、脑部等造成弓形虫眼病、脑病，还能引起孕妇或者孕畜流产、产死胎等不良后果。弓形虫的传播途径复杂多样，最常见的是经口传播，人或动物一般通过饮用含有弓形虫卵囊污染的水、或者误食含有组织包囊的生肉或未煮熟肉而感染；弓形虫病还可通过垂直传播造成胎儿的先天性弓形虫病。而临床上仅有乙胺嘧啶、磺胺嘧啶等药物对弓形虫速殖子有效，能够抑制弓形虫的生长繁殖，但长期使用会产生副作用还具有耐药性，目前十分缺乏抗弓形虫病的药物和疫苗；因此研制安全、有效的弓形虫疫苗对于弓形虫病的预防尤为重要。
2、由于代谢途径与虫体的生长繁殖及毒力的紧密关联，是药物和疫苗研发的潜在靶标。其中，葡萄糖经葡萄糖转运蛋白gt1转运进入虫体胞质中...
【技术保护点】
1.一株弓形虫三基因敲除虫株的构建方法，其特征在于，通过CRISPR基因编辑技术敲除弓形虫景天庚酮糖-1,7-二磷酸酯酶TgSBPase、转醛醇酶TgTAL和核酮糖-5-磷酸差向异构酶TgRuPE基因，获得弓形虫三基因敲除虫株；所述TgSBPase、TgTAL、TgRuPE基因的核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～3所示。
2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，具体包含以下步骤：
3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤S1中DiCreΔsbpase虫株的构建方法为：以pSAG1-Cas9-TgU6-sgTgUPRT质粒为模板...
【技术特征摘要】
1.一株弓形虫三基因敲除虫株的构建方法，其特征在于，通过crispr基因编辑技术敲除弓形虫景天庚酮糖-1,7-二磷酸酯酶tgsbpase、转醛醇酶tgtal和核酮糖-5-磷酸差向异构酶tgrupe基因，获得弓形虫三基因敲除虫株；所述tgsbpase、tgtal、tgrupe基因的核苷酸序列依次如seq id no：1～3所示。
2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，具体包含以下步骤：
3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤s1中dicreδsbpase虫株的构建方法为：以psag1-cas9-tgu6-sgtguprt质粒为模板构建tgsbpase特异性crispr/cas9敲除质粒；再以ploxp-dhfr*-loxp质粒为模板扩增ko-sbpase-loxp-dhfr*-loxp同源片段，将上述质粒和片段共同电转染至野生型弓形虫株中，进行药物筛选、pcr鉴定，获得dicreδsbpase虫株；
4.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，步骤s1中野生型弓形虫株为弓形虫rh(dicre)虫株。
5.一株弓形虫三基因敲除虫株，其特征在于，由权利要求1～4任一所述方法构建得到。
...【专利技术属性】
技术研发人员：夏宁波，郭雪芳，张鸿曦，姬诺，冯耀宇，肖立华，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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