【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种无动物血清来源脐带间充质干细胞来源外泌体制备与鉴定方法。
技术介绍
1、干细胞是未成熟的组织前体细胞，能够自我更新形成克隆细胞群，从而分化成多个细胞谱系。干细胞的治疗潜力可归因于三个关键作用：第一个是归巢作用，干细胞可以迁移到损伤部位。该机制被认为与白细胞迁移的机制相似，并且涉及细胞表面受体，例如趋化受体。第二个是干细胞具有分化能力，能分化成多种不同的细胞，可以补充或替换受损细胞。第三是影响周围组织的生物活性因子的分泌。间充质干细胞（mscs）是最重要的成体干细胞类型之一，mscs已被用于多种疾病的细胞治疗。
2、外泌体是由细胞质膜内陷形成的包含有的母细胞释放的颗粒物质的多泡内体或多泡小体。其囊泡膜源于细胞膜，含有其母细胞关键的蛋白标记物，具有与母细胞相似的归巢潜能；间充质外泌体（msc-exo）携带来自间充质干细胞（msc）的蛋白质、脂质、dna 和rna[10-12]，这是其治疗效果的基础。 msc-exos具有与mscs相似的生物学功能，但体积更小，可穿透生物膜，免疫原性低，可储存。与间...
【技术保护点】
1.一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：步骤一中，分离人脐带间充质干细胞(hucMSC)并用无血清培养基培养到P3代；培养的细胞从二氧化碳培养箱中取出，在倒置显微镜下观察细胞生长状况，进行拍照留存于间充质干细胞照片文件夹，每个样本一个文件夹，所有照片命名要求为：条码+倍数+代数+天数+日期。
3.根据权利要求1所述的一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：步骤二中，（1...
【技术特征摘要】
1.一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：
2.根据权利要求1所述的一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：步骤一中，分离人脐带间充质干细胞(hucmsc)并用无血清培养基培养到p3代；培养的细胞从二氧化碳培养箱中取出，在倒置显微镜下观察细胞生长状况，进行拍照留存于间充质干细胞照片文件夹，每个样本一个文件夹，所有照片命名要求为：条码+倍数+代数+天数+日期。
3.根据权利要求1所述的一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：步骤二中，（1）用10ml移液管每个t175培养瓶加干细胞温和消化酶3ml，均匀覆盖细胞贴壁面，37℃二氧化碳培养箱孵育1min或室温孵育3min。待细胞变圆后每瓶加10ml氯化钠注射液终止消化，快速震荡如若需要可轻击怕打方瓶侧面，用10ml移液管吹打3次细胞贴壁面，吸出细胞悬液经细胞筛过滤至2支50ml离心管中，各培养瓶每瓶加10ml氯化钠注射液，再吹洗一次，经细胞筛过滤汇入50ml离心管中。（2）将2个50ml离心管配平拧紧管盖后，放入冷冻离心机中2000rpm，4℃，离心6min，离心后将其取出缓慢倒弃上清，用16ml氯化钠注射液重悬合并沉淀至1管，用移液枪取样1.0ml于1.5mlep管内用于计数和流式检测。（3）加0.9%氯化钠注射液至40ml，用移液枪取500μl细胞悬液做内毒素检测，放入冷冻离心机中再次离心，2000rpm，4℃，离心6min，离心后将上清缓慢倒弃入50ml离心管内封口膜封好送样质检部用于细菌、支原体、真菌等检测。（4）每日上述操作时的旧培养基（除p0代以外）集中暂存于-80℃。待细胞及上清液相关的检测出结果（细菌、支原体、真菌等）后，选择符合标准的上清液于4℃缓慢解冻用于外泌体提取，不符合标准的则标注废弃、按医疗垃圾处理。
4.根据权利要求1所述的一种无动物血清培养人脐带间充质干细胞来源的外泌体制备与鉴定方法，其特征在于：步骤二中，（1）通过...
【专利技术属性】
技术研发人员：颜峰，游昌乔，杨满君，秦红，隆警，李灿，
申请(专利权)人：湖南南华爱世普林生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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