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一种可示踪诱导性多能干细胞的构建方法及其应用技术

技术编号:41812063 阅读:17 留言:0更新日期:2024-06-24 20:30
本发明专利技术属于生物医学技术领域,主要涉及一种可示踪诱导性多能干细胞的构建方法及其应用。本发明专利技术采用慢病毒载体基因转染技术,利用增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和萤火虫荧光素酶(Fluc‑Luciferase)报告基因组成的慢病毒载体感染诱导性多能干细胞(IPSCs),建立荧光示踪的诱导性多能干细胞,可以在不改变干性表达的情况下,对IPSCs进行示踪,经多次传代后,仍具有良好的生物发光成像能力;同时,不影响其发育为胰腺祖细胞,并且分化后的胰腺祖细胞仍然具有良好的荧光成像及生物发光成像能力。所以,本发明专利技术的构建方法能够在干细胞分化为胰岛类器官过程中对诱导多能干细胞的分化过程实现有效的示踪。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学,尤其涉及一种可示踪诱导性多能干细胞的构建方法及其应用


技术介绍

1、糖尿病是由遗传和环境等多种因素共同导致的以血糖代谢紊乱为主要表现的临床综合症。我国糖尿病发病率超过10%,目前已成为继肿瘤、心血管疾病之后的第三大威胁人类健康的慢性疾病。目前胰岛移植已经成为临床治疗ⅰ型糖尿病(t1d)的最佳方案,并有望成为ⅱ型糖尿病胰岛功能衰竭的理想治疗方案,然而供体短缺、移植物失活和功能丢失严重制约其临床应用。胰岛拟器官的出现为糖尿病患者带来了全新希望。近年来国内外已有多个团队利用不同干细胞或成体细胞诱导分化成具有胰岛素分泌功能的类β细胞,并且在动物模型中初步验证了其有效性。

2、近年来示踪剂在移植领域的研究主要集中在体外对移植细胞进行标记后将其注入活体体内,对其在体内的分布迁移、存活增殖及分化转归等生物学行为进行检测,以提供移植细胞存活情况的精确分析。但是在细胞追踪的过程中往往会出现细胞分裂导致标记稀释、造影剂从细胞中泄漏以及吞噬死亡细胞释放的造影剂的巨噬细胞的非特异性标记等干扰因素。所以这种外源性标记方法只适用于短期研究,不能达本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种可示踪诱导性多能干细胞的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述转染293T细胞包括以下步骤:

3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述抗性基因包括BSD基因,或者BSD基因和G418抗性基因。

4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,诱导性多能干细胞的汇合度为30%-40%时,进行所述慢病毒感染。

5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述慢病毒感染时,先弃去原诱导性多能干细胞的培养基,再将含病毒液的培养基加入诱导性多能干细胞。

>6.根据权利要求1...

【技术特征摘要】

1.一种可示踪诱导性多能干细胞的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述转染293t细胞包括以下步骤:

3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述抗性基因包括bsd基因,或者bsd基因和g418抗性基因。

4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,诱导性多能干细胞的汇合度为30%-40%时,进行所述慢病毒感染。

5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述慢病毒感染时,先弃去原诱导性多能干细胞的培养基,再将含病毒液的培养基加入诱导性多能干细胞。

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【专利技术属性】
技术研发人员:王悦冰孔德领王斓星于泽铭杨壮壮
申请(专利权)人:南开大学
类型:发明
国别省市:

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