一种真姬菇交配型基因的鉴别方法技术

本发明专利技术是将从不同真姬菇菌株分离得到担孢子单核菌株，对其进行交配型基因鉴别。在鉴别过程中，特别是平贴反应、栅栏反应和移植的应用，可不借助其它仪器和设备，较直观快速的初步鉴别真姬菇交配型基因。将此方法应用于杂交育种中，可方便的鉴别出真姬菇亲本和子代菌株的交配型基因，增强了杂交育种过程的目的性和有效性。采用本方法在鉴别交配型基因时间缩短５～１０天，杂交育种时理论上可使菌株对比筛选数量减少７５％，提高可结实性，尤其在多菌株多次杂交育种应用中，更为方便高效。然后根据鉴别结果选择亲和的，出现锁状联合的担孢子单核菌株进行配对杂交，再根据生长速度、生长势及农艺性状指标对杂交菌株进行筛选，获得稳定高产优质杂交菌株。

A hypsizigusmarmoreus mating type gene identification method

The present invention is the isolated spores monokaryons from different strains of Hypsizigus marmoreus, mating type gene identification. In the identification process, especially flat reaction, reaction and application of hurdle transplantation, can not use other instruments and equipment, relatively easy and rapid identification of mating type gene of hypsizygusmarmoreus. This method is applied to hybrid breeding, can easily identify the mating type genes in parents and offspring of Hypsizigus marmoreus strains, enhance the purpose and effectiveness of the hybrid breeding process. Using this method in the identification of mating type genes to shorten the time from 5 to 10 days, the hybrid breeding theory can make the strain contrast to reduce the number of 75%, improve fertility, especially in multi strain repeatedly cross breeding application, more convenient and efficient. Then according to the identification results of selection of compatible, appear spores monokaryons clamp to match the hybrid, and according to the growth potential and the agronomic traits of hybrid strains growth speed, stability, high yield and good quality hybrid strains.

【技术实现步骤摘要】

-本专利技术涉及生物基因的
，具体地说是根据真姬菇担孢 子单核体交配型基因的鉴别方法，可提高真姬菇单-单杂交育种中主 动性和有效性。
技术介绍
真^5燕， 又名蟹味燕、海鲜菇、鸿喜菇、玉蕈、胶玉蘑，隶属于担子菌亚门、层菌纲、伞菌目、 白蘑科、离褶菌族、玉蕈属，是一种质地脆嫩，味道鲜美，营养丰富， 具有多种保健功效的珍稀食用菌，深受广大消费者的喜爱。目前，我国与日本、韩国的一些大型食用菌企业己经能够通过控 制温度、湿度、光照和空气成分进行工厂化栽培真姬菇，并且取得了 良好的经济效益，但是进行工厂化生产用的菌种易退化，且已出现老 化现象，给工厂化生产带来了不稳定因素。因此通过杂交育种，选育 出既稳定高产优质又适合工厂化栽培的菌株是真姬菇工厂化生产亟 待解决的问题。而在己开展的杂交育种过程中，效率一般较低，效果 也不理想。其主要原因是真姬菇是标准四极性异宗结合的高等担子 菌，其交配系统受A和B两对交配型基因的控制。交配型基因的多型 性和对育性是其遗传研究和菌种改良的基础。而有关真姬燕交配型基 因的鉴别方法国内尚未见报道。
技术实现思路
■本专利技术的目的在于提供一种改进的真姬范交配型基因的鉴别方 法，该方法可稳定准确快速的从真姬菇孢子群体中得到四种标准交配 型的单核体，提高真姬菇单-单杂交育种过程中主动性和有效性。 为了实现上述目的，本专利技术的技术方案是 一种真姬菇交配型基因的 鉴别方法，其特征在于a、从不同真姬菇菌株分离得到担孢子单核 菌株，选一真姬菇孢子单核菌株作为出发测试菌株，编号为Tl，与 所有担孢子单核菌株进行配对；b、若与T1配对亲和，且出现锁状联 合，则该担孢子单核菌株与Tl菌株交配型基因的A、 B因子都不同； 若与Tl配对不亲和，且出现平贴反应，则该担孢子单核菌株与Tl菌 株交配型基因的A因子相同B因子不同；若与T1配对不亲和，且出 现栅栏反应，则该担孢子单核菌株与Tl菌株交配型基因A因子不同 B因子相同；若与Tl配对无上述三种现象，则该担孢子单核菌株交 配型基因与T1菌株A、 B因子都相同。本专利技术是将从不同真姬菇菌株分离得到担孢子单核菌株，对其进程中，特别是平贴皮应、栅栏反应的应 用和移植的应用，鉴别时间縮短5 10天，且可不借助其它仪器和设 备，较直观快速的初步鉴别真姬菇交配型基因。本专利技术中利用了双核 菌株生长速度快于单核菌株的性质，运用移植的方法将这一性质放 大，能在较短时间明显的将四种交配情形加以区分。将此方法应用于 杂交育种中，可方便的鉴别出真姬菇亲本和子代菌株的交配型基因， 增强了杂交育种过程的目的性和有效性。采用本方法理论上可使菌株对比筛选数量减少75%，提高可结实性，尤其在多菌株多次杂交育种 应用中，更为方便高效。然后根据鉴别结果选择亲和的，出现锁状联 合的孢子单核菌株进行配对杂交，再根据生长速度、生长势及农艺性 状指标对杂交菌株进行筛选，获得稳定高产优质杂交菌株。 附图说明-图1为本专利技术实施过程的工艺流程图图2为本专利技术的锁状联合过程示意图图3为本专利技术的平贴反应菌落照片图4为本专利技术的栅栏反应菌落照片图5为本专利技术的两个亲和菌株的菌落照片图6为本专利技术的两个交配型基因相同菌株菌落照片具体实施例方式下面结合附图和实施例对本专利技术作进一步的描述。，其与现有技术的区别在于a、从不同真姬菇菌株分离得到担孢子单核菌株，选一真姬菇孢子单 核菌株作为出发测试菌株，编号为Tl,与所有担孢子单核菌株进行 配对；b、若与T1配对亲和，且出现锁状联合，则该担孢子单核菌株 与Tl菌株交配型基因的A、 B因子都不同；若与Tl配对不亲和，且 出现平贴反应，则该担孢子单核菌株与Tl菌株交配型基因的A因子 相同B因子不同；若与T1配对不亲和，且出现栅栏反应，则该担孢 子单核菌株与Tl菌株交配型基因A因子不同B因子相同；若与Tl 配对无上述三种现象，则该担孢子单核菌株交配型基因与Tl菌株A、 B因子都相同。a步骤中，真姬菇菌株分离得到担孢子单核菌株配对包括如下步 骤a)、选成熟开伞真姬菇的子实体，剪去菌柄，菌褶一面平贴在平 板上，置于25'C培养箱收集孢子；b)、用接种环蘸取少量担孢子， 于无菌水中制备孢子悬浮液，稀释至400倍显微镜下每个视野有8-12 个孢子；c)、取70pl悬浮液涂平板，25。C暗培养7天，在显微镜下 用接种针挑取已萌发的孢子连同一小块培养基，并转接到平板上，再 培养5天后镜检，确定无锁状联合后保存备用；d)、将两配对供试单 核菌株接种于木屑浸汁培养基上对峙培养7 10天，温度保持在25°C ， 沿与反应区相垂直的方向穿过两菌落切取长3cm宽0.5cm的菌块， 转移至马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上，在25。C的温度下继续培养5 10天。其中，木屑浸汁培养基是在200g木屑浸汁中，加入 琼脂20g，再加蒸馏水至1000ml制得的，再转接到马铃薯葡萄糖琼 脂培养基(即PDA培养基)上进行鉴别，这里的马铃薯葡萄糖琼脂 培养基(即PDA培养基)是现有技术，直接可在市场上采购，这里 就不再赘述其具体的配方了。根据c歩骤所得出的鉴别结果选择亲和的担孢子单核菌株配对杂 交，对杂交菌株菌丝体生长速度和生长势及其农艺性状进行测定，最 后进行杂交菌株的筛选。选择亲和的担孢子单核菌株配对杂交是指从 上述鉴别的担孢子单核菌株中挑选出A、 B因子不同的进行两两配对 杂交，在光学显微镜下观察菌丝有无锁状联合，将有锁状联合的杂交 菌株纯化、编号。特别要说明的这里所使用的转移过程对峙生长的单核菌株先是 培养在木屑浸汁培养基上的，由于此培养基营养相对较低，菌株的气生菌丝一般较少，这对于观察现象的形成是有利的；接下来将培养一段时间的菌落移植到PDA培养基上，由于此培养基的营养较丰富，原 先的现象在此被放大，较传统方法縮短5 10天，且现象更为明显，同 对，便于挑取杂交菌株。而过去其他食用菌中所采用的鉴别方法都是 在一种培养基上进行。这样不但要等菌落几乎长满平板才可判别，而 且现象不是特别清晰。 实施例下面结合图l和实施例对本专利技术进一步说明。1、 亲本菌株培养、担孢子分离和杂交菌株培养用PDA培养基去皮 马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000ml， pH自然； 栽培培养基木屑40%，棉籽壳24%，麸皮35%，石膏1%，每瓶干 重240g，后补充含水量为60%-62%;木屑浸汁培养基200g木屑浸汁，加琼脂20g，加蒸馏水至1000ml。2、 菌株材料真姬菇SIEF2632和S正F3132由中国微生物菌种保藏管理委员会, 农业微生物中心上海食用菌分中心提供。3、 担孢子单核菌株的分离选成熟开伞真姬菇SIEF2632和S正F3132的子实体，剪去菌柄，菌 褶一面平贴在平板上，置于25T:培养箱收集孢子；用接种环蘸取少量 担孢子，于无菌水中制备孢子悬浮液，稀释至400倍显微镜下每个视 野有8-12个孢子；取7(^1悬浮液涂平板，25。C暗培养7天，在显微镜下 用接种针挑取已萌发的孢子连同一小块培养基(约lmm2)，并转接到平 板上，再培养5天后镜检，确定无锁状联合后保存备用。其中锁状联合(clamp connection)为双核菌丝的两个核分裂之前 可以产生勾状分枝的现象(过程示意图，见图2)。 3、交配型本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种真姬菇交配型基因的鉴别方法，其特征在于：ａ、从不同真姬菇菌株分离得到担孢子单核菌株，选一真姬菇孢子单核菌株作为出发测试菌株，编号为Ｔ１，与所有担孢子单核菌株进行配对；ｂ、若与Ｔ１配对亲和，且出现锁状联合，则该担孢子单核菌株与Ｔ１菌株交配型基因的Ａ、Ｂ因子都不同；若与Ｔ１配对不亲和，且出现平贴反应，则该担孢子单核菌株与Ｔ１菌株交配型基因的Ａ因子相同Ｂ因子不同；若与Ｔ１配对不亲和，且出现栅栏反应，则该担孢子单核菌株与Ｔ１菌株交配型基因Ａ因子不同Ｂ因子相同；若与Ｔ１配对无上述三种现象，则该担孢子单核菌株交配型基因与Ｔ１菌株Ａ、Ｂ因子都相同。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯志勇，刘明广，高君辉，陈明杰，陈辉，
申请(专利权)人：上海市农业科学院，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]