肌钙蛋白Ⅰ血清快速检测试剂盒(胶体金法)制造技术

本发明专利技术属于生物科技领域，本发明专利技术公开了一种肌钙蛋白Ｉ血清快速检测试剂盒（胶体金法）制作及工艺，采用了金标法测定人血清样品中ｃＴｎＩ的量，心肌钙蛋白Ｉ（ｃＴｎＩ）的分子量为２２．５ＫＤ，其连同肌钙蛋白Ｔ和肌钙蛋白Ｃ构成结构复合物，在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白－肌球蛋白相互作用的转化过程中起着重要作用，本试剂盒采用双抗夹心免疫法，当标本加入样品槽后，通过结合垫和金抗体结合，复合物沿膜流动和抗体在检测区域反应。如果标本中存在有可检出浓度或更浓的标志物，就会在检测区出现一条色带。如果没有就会保持无色。标本继续移动至控制区域，出现粉红－玫瑰红的色带，说明试验正常结果有效。本发明专利技术的有益效果是肌钙蛋白Ｉ血清快速检测试剂盒，性能极其稳定，用户使用极其方便、能准确快速检测。

Rapid test kit for troponin I serum (colloidal gold)

The invention belongs to the field of biotechnology, the invention discloses a serum troponin I rapid test kit (colloidal gold) to produce and process, using the gold standard method for the determination of cTnI in human serum sample volume, cardiac troponin I (cTnI) the molecular weight of 22.5KD, which together with troponin T and troponin the structure of C complex, plays an important role in the transformation process in the heart of the intercellular calcium signaling of actin myosin interaction, the kit adopts double antibody sandwich immunoassay, when the sample is put into a sample cell, through the combination of combined pad and gold antibody complexes along the membrane fluidity and antibody in the detection area of reaction. If there is a detectable concentration or a thicker marker in the specimen, a ribbon appears in the test area. If not, it will remain colorless. The specimen continues to move to the control area, showing a pink rose ribbon, indicating that the test is normal and the result is valid. The beneficial effect of the invention is that the troponin I serum fast detection kit has extremely stable performance, and the user is extremely convenient to use and can detect accurately and quickly.

【技术实现步骤摘要】
肌转蛋白I血溏快速检獮试剂盒(胶体金法)扶术領械本专利技术提供了一种心肌梗死快速检测的肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒 及检测方法。背承技术心肌缺血性损伤,特别是急性心肌梗塞(AMI)是威胁人类生命的主要疾病 之一，临床化学家和临床科学家一直努力寻找和探索特异性好、灵敏度高的血 清指标。心肌肌铐蛋白I (cardiac troponin I,cTnI)具有高度的心肌特异 性，当心肌细胞受损时，血液中的cTnl出现时间早，持续时间长，与心肌损 伤程度及预后密切相关，因此，它可作为心肌损伤的一种特异性指标。
技术实现思路
本专利技术提供了一种心肌梗死快速检测的肌钙蛋白I血清快速检測试剂盒 及检测方法。本专利技术通过如下技术解决方案实现的 一种肌钙蛋白I血清快速检測试 剂盒，其特征在于 一种肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒，其特征在于心 肌钙蛋白I (cTnl)的分子量为22.5KD,其连同肌钙蛋白T和肌钙蛋白C构 成结构复合物。在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白-肌球蛋白相互作用的转化 过程中起着重要作用。人的cTnI与骨骼肌中的形式在结构上有所不同，它的 氨基端上多了一个氨基酸残基。使得cTnl成为一个特异性的标志物。在心肌 梗死(AMI)发生后，cTnl便迅速释放入血液循环中 1. cTnl标记用单克隆抗体的预处理 1.1 透析(纯化水，24小时)1.2离心去上清(4~10C 10000转/分钟、5分钟)1.3 BCA法则浓度(物料平衡)1.4 PH的调节((Umol/LK2C03量的确定) 1.5最佳标记量的确定1.6分装(5000人份量/支)、-20度冻存2. 试剂的配制2.1 1%的柠橡酸三钠的配制2.2 1%的氯金酸的配制2.3 0.01%的氯金酸的配制2.4 0.1ml/LK2CO3的配制2.5 10%的氯化钠的配制2.6 1%的叠氮钠的配制2.7 1Cm的BSA的配制2.8 lmol/lH5S的配制2.9 0.05mol/lPBS的配制 2.10胶体金复溶液的的配制3. 胶体金的制备3.1 量取0.01%的HAuCL4溶液 3.2加热至沸腾迅速加入1 %+ 棣酸三钠溶液，搅拌均匀(比例100ml 0.01%的HAuCL4溶液加1.6 ml 1 %柠檬酸三钠溶液) 3.3继续加热10分钟冷却至室温,用超纯水恢复至原体积 3.4 0.22ym微孔滤膜过滤除菌 3.5送检、装瓶、貼标签4. cTnl免疫金的制备和干燥 4.1 cTnl标记抗体的稀释按照每生产5000人份4咖宽的cTnl试纸条需1支cTnl标记抗体计算，领取相应量的抗体，用0.05mo1/1 PBS稀释到0.5mg/ml。4.2生产前小试 a取lml胶体金b调PH (0. lmol/L K2C03的量，混匀5min) c根据生产指令加入CTnIAbl,混匀10min d加入100ull(WffiSA,混匀10min e离心1000转/min， 30min(要求环境温度4_10°C)f 30%复溶，浸泡聚簾膜0.801/条(0.6cmX30cm) g温度20"301C，相对湿度30-35%干燥5小时h 送质检部检验4.3 cTnl抗体标记1) 标记小试质检质检合格，取胶体金,电磁搅拌(以生产1000人份5mm宽的肌钙蛋白I胶体金试纸条约需50ml胶体金来计算。)2) 调PH (0. lmol/L K2CCb的量)，混匀5min3) 根据最适标记量加入CTnIAbl，混匀10min4) 加入100ull0%BSA,混匀lOmin5) 离心1000转/min, 30min， 4-IO'C6) 30%复溶，浸泡聚酯膜25.3迈l/张(20cmX30cm)7) 温度20"30r,相对湿度30-35%干燥5小时8) 抽一条0.6cm宽送质检部做膜金匹配检渕9) cTnl免疫金送中间品室暂存5. cTnl包被板的制备 5.1包被抗体的稀释羊抗鼠IgO. 05mol/LPBS稀释到1. 2mg/ml工作浓度cTnl捕获抗体用0.05mol/LPBS稀释到1. lmg/ml工作浓度5. 2包被前小试1) 各取20ul试包被1条20cm长的膜，线浓度1.0ul/cm2) 2"C-8t)过夜3) 貼膜4) 温度20"30t:、相对湿度30~35%干燥5小时 虽后送质检部检验质检合格。5. 3包被生产1) cTnl包被小试质检合格单2) 羊抗鼠IgG、 cTnl捕获抗体工作浓度包被质控线和检测线*线浓度1.0ul/cm3) 2°C-8C过夜4) 贴膜5) 温度2Ch3(TC、相对湿度30-35%干燥5小时6) 抽l板送质检部作膜金匹配7) 密封后送中间品库暂存本专利技术的有益效果是肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒，性能极其稳定，用户使用极 其方便、能准确快速检测。制作肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒的工艺流程图注L 所代表的过程必须在净化车间内操作2. "所代表的过程必须在温度20-30度、湿度30-35度操作，另外cTnl包被f的制备以及cTnl免疫金的制备的干燥过程也必须在温度20-30度、湿度30-35度进行。3 " +"代表关键控制点具体实施例方式肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒的配制操作如下心肌钙蛋白I (cTnl)的分子量为22.5KD，其连同肌钙蛋白T和肌钙蛋 白C构成结构复合物。在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白-肌球蛋白相互作用 的转化过程中起着重要作用。人的cTnl与骨骼肌中的形式在结构上有所不同， 它的氨基端上多了一个氨基酸残基。使得cTnl成为一个特异性的标志物。在 心肌梗死(AMI)发生后，cTnl便迅速释放入血液循环中。释放的模式和CK-MB 相同(在AMI发生4-6个小时以后)。然而，CK-MB的水平在36-48小时后恢 复正常，cTnl可以持续升高6-10天。在正常健康人体内，cTnl水平是非常 低的，在骨骼肌受损的病人体内也检测不到cTnl。因此cTnl是诊断心肌梗死 的一个特异性指标。本试剂盒采用双抗夹心免疫法，当标本加入样品槽后，通过结合垫和金 抗体结合，复合物沿膜流动和抗体在检测区域反应。如果标本中存在有可检 出浓度或更浓的标志物，就会在检测区出现一条色带。如果没有就会保持无 色。标本继续移动至控制区域，出现粉红-玫瑰红的色带，说明试验正常结果 *双。产品名称肌钙蛋白I血清快速检测试剂盒(胶体金法)规 格25人份/盒适用范围本试剂盒是免疫层析基础上的一步法体外诊断试剂盒。用来对发生心肌 梗死时人血清中的心肌钙蛋白I进行定性检测。检测原理胶体金法应用双抗体夹心法原理，以胶体金作为指示标记，交联抗肌钙蛋白I抗体， 另一抗体为捕获抗体，与血液中的肌钙蛋白I结合并显色。测试时，样本向 检测区及质控区移动，如果样品中含有肌钙蛋白I，它就会和试剂中的金标抗 体组成抗原抗体复合物，再和检测区中的相对应的捕获抗体形成紫红色的色 带。如果样品中肌钙蛋白I水平低于最低检测限，检测区中就不会有色带出 现。在任何情况下，质控区色带都应出现。质控区色带的出现表明反应系统 ，泉主要组成成分测试卡片和一份干燥剂、 一个滴管一起装于铝箔袋中，每个试剂盒有25 个相同的铝箔袋。自备材料1、 血清收集设备2、 计时装置样本要求1、 必须在标准实验室环境下采集血清标本。2、本文档来自技高网...

【技术保护点】
心肌钙蛋白Ｉ（ｃＴｎＩ）的分子量为２２．５ＫＤ，其连同肌钙蛋白Ｔ和肌钙蛋白Ｃ构成结构复合物，在心脏中的细胞间钙信号肌动蛋白－肌球蛋白相互作用的转化过程中起着重要作用，本试剂盒采用双抗夹心免疫法，当标本加入样品槽后，通过结合垫和金抗体结合，复合物沿膜流动和抗体在检测区域反应。如果标本中存在有可检出浓度或更浓的标志物，就会在检测区出现一条色带。如果没有就会保持无色。标本继续移动至控制区域，出现粉红－玫瑰红的色带，说明试验正常结果有效。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：宣生良，
申请(专利权)人：上海一滴准生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]