一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原及制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原及制备和应用。现有技术中存在UreB蛋白纯化难度大，口服重组蛋白疫苗耐受性和抗原被稀释、降解甚至变性失活的技术问题。本发明专利技术提供一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原UreB及其制备方法，在UreB蛋白上增加了组氨酸（his）和谷胱甘肽转移酶（GST）蛋白，表达为his‑GST‑UreB融合蛋白，通过纯化后UreB蛋白纯度达到95%，每升发酵液的产率可以获得122mg蛋白。且动物实验证明其有效刺激机体产生免疫应答并具备良好的免疫保护作用，可作为预防幽门螺杆菌感染的疫苗候选成分。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学领域，具体涉及一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原及制备和应用。

技术介绍

1、幽门螺杆菌（ helicobacter pylori，hp)是一种革兰阴性、螺杆状、微需氧菌，可以在胃、黏膜和十二指肠上皮持续存在。1982 年澳大利亚学者marshall 和warren 首次报道了从慢性胃炎和胃溃疡患者的胃黏膜中分离出幽门螺旋杆菌，是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类。已有大量研究证实，hp是胃肠道疾病的常见病原体，是慢性b型胃炎、胃和十二指肠溃疡的主要病因。hp也是胃肠癌、胃黏膜淋巴组织淋巴癌的关键病因，通过对细胞内信号的调控引起胃上皮细胞的遗传不稳定，影响dna损伤修复系统，促进了胃上皮细胞的肿瘤转化。1994年国际癌症研究中心就将其列为首要i类胃癌的致癌因子。2017 年世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单显示，幽门螺杆菌属于i类致癌物，可诱发胃癌和淋巴增生性胃淋巴瘤等肿瘤。

2、尿素酶(urase) 是一种镍依赖性酶，催化尿素水解成氨和碳酸，是幽门螺杆菌在本文档来自技高网...

【技术保护点】

1. 一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原，其特征在于，所述抗原为UreB，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，融合蛋白his-GST-UreB的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，融合蛋白his-GST-UreB编码核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

2.根据权利要求1所述的口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，所述S1中表达载体为pET-29b（+），重组工程菌为pET-UreB/BL21。

4.根据权利要求2所述的口服幽门螺杆...

【技术特征摘要】

1. 一种口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原，其特征在于，所述抗原为ureb，氨基酸序列如seq id no：1所示，融合蛋白his-gst-ureb的氨基酸序列如seq id no：2所示，融合蛋白his-gst-ureb编码核苷酸序列如seq id no:3所示。

2.根据权利要求1所述的口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.根据权利要求2所述的口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，所述s1中表达载体为pet-29b（+），重组工程菌为pet-ureb/bl21。

4.根据权利要求2所述的口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，所述s2包括以下子步骤：

5. 根据权利要求4所述的口服幽门螺杆菌疫苗重组蛋白抗原的制备方法，其特征在于，所述s21、s22、s24结束后取菌液样品做纯菌检查和镜检，细菌为革兰氏阴性杆菌，s21、s22、s23、s25结束后菌液od600值分别为大于1.50、大于1.50、20.00、不超过1.00；所述s23菌液od600在10.00时开始以0.015 l/分钟补加甘油，直到诱导结束；所述s24诱导开始时以0.02 l/分钟补加含有酵母提取物24.0 g/l，胰蛋白胨12.0 g/l的培养基。

6.根据权利要求2所述的口服幽门螺杆菌...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈克平，陈正军，刘冬，李建霖，樊钒，税静，朱冲，江之永，陶杨，明辉，
申请(专利权)人：成都欧林生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：