一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法技术

本发明专利技术涉及核酸检测技术领域，具体为一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，S1：构建多靶点探针库；S2：样本处理；S3：探针杂交；S4：信号扩增与检测；S5：结果分析。本发明专利技术能够针对目标核酸的多个靶点，设计由相同荧光基团标记的n组核酸探针（n≥2），将1:1的探针和目标物的结合，转换成1:n的信号报告出来，降低Ct值，提高核酸检测敏感性，进一步拓宽核酸检测试剂盒的应用范围，为临床感染诊断、药物治疗效果监测及转阴判断等提供准确数据，相较传统的单靶点PCR‑荧光探针法，本方法可提升检测灵敏度约1个数量级，最低检测阈值低于10 copies/μL，低拷贝数目标核酸的阳性检出率可提升4‑5倍，极大提高了核酸检测的灵敏度、敏感性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，特别是涉及一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，属于核酸检测。

技术介绍

1、核酸探针是一类由核酸或类核酸分子组成的分子探针，具有两个基础功能，分别是目标物识别和信号转导。目标物识别能力要求探针能够高度亲和及特异的结合待测组分中的目标物，信号转导则要求将探针和目标物的结合转换为易于检测的信号报告出来。经典的核酸探针设计原理一般是：核酸探针与目标物结合后，促使核酸探针结构的变化，进而触发信号开关。其中，传统的pcr-荧光探针法是在pcr体系中加入1对引物的同时，加入1条荧光标记、可结合靶序列的特异性寡核苷酸探针，其5'端和3'端分别标记为荧光报告（reporter， r）基团和荧光淬灭（quencher，q）基团。反应前，探针完整，r发出的荧光被q吸收，检测不到荧光信号；探针随机结合到单链dna（single stranded dna，ssdna）上进行扩增时，水生栖热菌dna聚合酶（thermus aquaticus dnapolymerase，taqdna聚合酶或taq酶）的5’端至3’端天本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述S1中的特异性探针组由多组相同荧光基团标记的探针组成。

3.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述S1中的探针为核酸、肽核酸或其他适用生物分子。

4.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述S2中的样本处理包括核酸提取、逆转录、PCR扩增等步骤。

5.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏...

【技术特征摘要】

1.一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述s1中的特异性探针组由多组相同荧光基团标记的探针组成。

3.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述s1中的探针为核酸、肽核酸或其他适用生物分子。

4.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述s2中的样本处理包括核酸提取、逆转录、pcr扩增等步骤。

5.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述s4中的信号扩增技术包括有链式反应、滚环复制或其他等，所述信号扩增技术采用链式反应、滚环复制或其他中的一种或多种。

6.根据权利要求1所述的一种基于多靶点扩增提高核酸检测敏感性的方法，其特征在于：所述s4中对探针的检测采用荧光检测或者电化学...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜峰，韩小虎，陈泽良，张力华，
申请(专利权)人：深圳蓝韵生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：