冻存脐带血NK细胞的培养方法技术

本发明专利技术提供了一种冻存脐带血NK细胞的培养方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术提供的冻存脐带血NK细胞的培养方法，将复苏后的脐带血去掉冻存液后直接进行NK细胞的激活和扩增，而不经过常规的单个核细胞分离过程，简化了操作过程，提高了冻存脐带血单个核细胞和NK细胞的回收率，而对NK细胞的体外扩增能力和杀伤活性没有影响，因此，本发明专利技术可以显著提高一份冻存脐带血体外扩增NK细胞的最终产量。本发明专利技术通过在激活培养的培养基中添加小分子组合CEPT(Chroman 1、Emricasan、Trans‑ISRIB和Polyamine Solution)，能够显著提高冻存脐带血NK细胞扩增倍数和NK细胞纯度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种冻存脐带血nk细胞的培养方法。

技术介绍

1、现有技术方案对于用于nk细胞扩增的单个核细胞通常采用ficoll或淋巴细胞分离液分离获得，然而该方法存在以下问题：

2、首先，一份脐带血中nk细胞的数量有限，脐带血冻存后nk细胞活率降低导致nk细胞数量进一步减少；其次，冻存脐带血分离单个核细胞会出现nk细胞回收率低、红细胞残留多等问题；另外，相对于新鲜脐带血nk细胞，冻存脐带血nk细胞激活扩增前期增殖较为缓慢。

3、以上问题极大的限制了nk细胞的最终产量。

4、有鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

1、本专利技术的目的在于提供一种冻存脐带血nk细胞的培养方法，以解决上述问题。

2、第一方面，本专利技术提供了一种冻存脐带血nk细胞的培养方法，包括以下步骤：

3、将复苏后的冻存脐带血去除冻存液后依次进行激活培养和扩增培养，获得nk细胞；

4、所述激活培养的培养基主要由动物细胞培养基a和添加在动物细胞培养基a本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种冻存脐带血NK细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述激活培养的时间为4-6天。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，激活培养过程中，激活培养2-3天后，补充激活培养的培养基。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述扩增培养的培养基主要由动物细胞培养基B和添加在动物细胞培养基B中的人AB血清、重组人IL-2细胞因子和重组人IL-15细胞因子组成；所述人AB血清的加入量为动物细胞培养基B体积的2％-10％；所述重组人IL-2细胞因子的终浓度为200-1000IU/mL；所...

【技术特征摘要】

1.一种冻存脐带血nk细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述激活培养的时间为4-6天。

3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，激活培养过程中，激活培养2-3天后，补充激活培养的培养基。

4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述扩增培养的培养基主要由动物细胞培养基b和添加在动物细胞培养基b中的人ab血清、重组人il-2细胞因子和重组人il-15细胞因子组成；所述人ab血清的加入量为动物细胞培养基b体积的2％-10％；所述重组人il-2细胞因子的终浓度为200-1000iu/ml；所述重组人il-15细胞因子的终浓度为20-60ng/ml；

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【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，张华，杜为，吴雨桐，赵浩荻，杨文玲，
申请(专利权)人：协和干细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：