【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种用于造血干细胞培养的组合物、培养基、造血干细胞的培养方法。
技术介绍
1、造血干细胞移植是治疗多种血液病恶性肿瘤的有效治疗手段，与骨髓和外周血来源的造血干细胞相比，脐血来源的造血干细胞具有低免疫原性，移植后低gvhd，干性潜能强等优点。然而脐带血中有限的造血干细胞数量限制了临床应用中脐血造血干细胞移植的广泛应用。因此，有效的造血干细胞体外扩增技术对脐血造血干细胞资源的充分利用至关重要。脐血造血干细胞扩增的探究已经有30多年之久，研究者通过添加细胞因子或化学小分子来补充细胞培养中所需的营养成分，调节细胞状态，使细胞在扩增过程中更好地维持细胞干性。随着生物技术的发展，扩增的手段不断多样化，包括基因编辑或生物材料的应用，通过更好模拟细胞体内状态实现更好维持造血干细胞干性的效果。
2、尽管目前存在不同的造血干细胞扩增方法，但多数以添加细胞因子为主体，在此基础上通过化学小分子的添加，或基因编辑来进一步促进细胞增殖及干性维持。新型生物材料的应用也是通过模拟造血干细胞体内骨髓龛环境，实现维持细胞干性的效果。不同的扩增方法达成的扩增倍数以及细胞干性维持程度参差不齐，且多数以小体积研究为扩增体系。基于共培养或水凝胶的培养，在基因研究中可以有助于人们更好地了解造血干细胞的命运选择机制和疾病模型的研究，然而工艺放大环节将会面临更高成本以及工艺难点，因而在实际临床转化的中并不是理想的大规模培养方式。
3、原megenta公司(sr1)，excetherpeutic公司(um171)以及gamid
4、表1
5、
6、
7、omisirge的培养中添加了fbs和il-6，以及抗生素。然而fbs和抗生素残留通过培养后的清洗无法有效去除，对于人体或有潜在危害，且增加了产品放行检测的工作量和检测成本。该终产品的cd34+纯度低，从制作到成品所需时间为21±2天。这使得产品成本增加的同时，增加了临床患者的等待时间，导致14％的患者因疫病发展较快，未能及时获得治疗机会，增加了产品在临床应用中的潜在风险。um171(excellthera)的产品制备周期为7天，扩增倍数显著低于其他产品，受总数限制影响移植效果，存在临床应用风险。因此，改进造血干细胞的培养方法，在更短制备周期中，获得数量更多，纯度更高的造血干细胞产品是目前亟待解决的问题。
8、有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的第一目的在于提供一种用于造血干细胞培养的组合物，以弥补上述造血干细胞的培养过程中的不足，该造血干细胞培养的组合物能够在培养过程中，有效扩增造血干细胞的同时，更好地维持干细胞纯度和细胞状态。基于该用于造血干细胞培养的组合物，本专利技术的目的还在于提供包含其的培养基和试剂盒，以及应用其的造血干细胞的培养方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
3、第一方面，提供了一种用于造血干细胞培养的组合物，该组合物由如下浓度的组分组成：sr1 750～1000nm、tpo 40～160ng/ml、scf 40～120ng/ml、flt-3l 40～60ng/ml和igfbp2 50～100ng/ml。
4、第二方面，还提供了一种用于造血干细胞培养的培养基，该培养基包括基础培养基和第一方面的用于造血干细胞培养的组合物。
5、第三方面，还提供了一种用于造血干细胞培养的试剂盒，该试剂盒包括：第一方面的用于造血干细胞培养的组合物，和/或，第二方面的用于造血干细胞培养的培养基。
6、第四方面，还提供了一种造血干细胞的培养方法，该培养方法包括使用含有第一方面的用于造血干细胞培养的组合物的培养基培养造血干细胞。
7、可选的实施方式中，所述培养方法的培养容器包括细胞培养袋。
8、可选的实施方式中，在细胞培养过程中，补充的培养基中所含有用于造血干细胞培养的组合物的量与补充培养基后实际培养体系的总体积对应。
9、第五方面，还提供了第一方面的用于造血干细胞培养的组合物、或第二方面的用于造血干细胞培养的培养基、或第三方面的用于造血干细胞培养的试剂盒、或第四方面的培养方法在制备用于治疗血液疾病的细胞疗法产品中的应用。
10、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
11、本专利技术提供的用于造血干细胞培养的组合物由sr1、tpo、scf、flt-3l和igfbp2组成，并优化了各组分的用量。本专利技术通过细胞因子的对比，优化细胞因子的组合，替换了会加快造血干细胞分化的il-6，通过提高tpo浓度，添加igfbp2，实现更好维持细胞状态和纯度。在优选的实施方式中，通过优化培养体系，本放大培养体系可以将脐血cd34+细胞扩增100倍以上，纯度维持在30％以上，活率90％以上。实现了无动物源、无抗生素添加的全封闭式培养，缩短周期，节约成本，为临床应用转化提供了更好的放大规模培养方式。
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1.一种用于造血干细胞培养的组合物，其特征在于，由如下浓度的组分组成：SR1750-1000nM、TPO 40～160ng/mL、SCF 40～120ng/mL、Flt-3L 40～60ng/mL和IGFBP250-100ng/mL。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，由如下浓度的组分组成：SR1 750nM、TPO80ng/mL、SCF 50ng/mL、Flt-3L 50ng/mL和IGFBP2 50ng/mL。
3.用于造血干细胞培养的培养基，其特征在于，包括基础培养基和权利要求1或2所述的组合物。
4.用于造血干细胞培养的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的用于造血干细胞培养的组合物，和/或，权利要求3所述的用于造血干细胞培养的培养基。
5.一种造血干细胞的培养方法，其特征在于，包括使用含有权利要求1或2所述的组合物的培养基培养造血干细胞；
6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，培养容器包括细胞培养袋。
7.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，在细胞培养过程中，补充的培
8.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，培养周期为10～14天；
9.根据权利要求5～8任一项所述的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：
10.权利要求1或2所述的用于造血干细胞培养的组合物、或权利要求3所述的用于造血干细胞培养的培养基、或权利要求4所述的用于造血干细胞培养的试剂盒、或权利要求5～9任一项所述的培养方法在制备用于治疗血液疾病的细胞疗法产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于造血干细胞培养的组合物，其特征在于，由如下浓度的组分组成：sr1750-1000nm、tpo 40～160ng/ml、scf 40～120ng/ml、flt-3l 40～60ng/ml和igfbp250-100ng/ml。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，由如下浓度的组分组成：sr1 750nm、tpo80ng/ml、scf 50ng/ml、flt-3l 50ng/ml和igfbp2 50ng/ml。
3.用于造血干细胞培养的培养基，其特征在于，包括基础培养基和权利要求1或2所述的组合物。
4.用于造血干细胞培养的试剂盒，其特征在于，包括：权利要求1或2所述的用于造血干细胞培养的组合物，和/或，权利要求3所述的用于造血干细胞培养的培养基。
5.一种造血干细胞的培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：张宇，李光昭，赵云艳，刘容志，
申请(专利权)人：协和干细胞基因工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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