一种两阶段培养基混合流加发酵方法技术

本发明专利技术公开了一种两阶段培养基混合流加发酵方法，属于大肠杆菌蛋白高密度发酵技术领域，针对了含有的各种未知组分高浓度时容易导致发酵抑制。通过两阶段培养基混合流加可以通过平衡碳氮比、平衡有机氮源及无机氮源的流加配比，而利于降低成本，避免抑制的问题，包括以下步骤：S1：将大肠杆菌BL21在M9培养基上进行处理养,使大肠杆菌BL21在设置温度范围内发酵，使得pH数值调控至设置范围；本发明专利技术通过诱导前采用M9类简单合成培养基，诱导后采用TB等氮源丰富培养基及M9全合成补料两种培养基交替补料的方式，交替补料时，通过溶氧反馈补料表明菌体生长碳源不足而补M9补料，通过pH反馈补料表明氮源过量而停止补氮源，以实现碳氮比的均衡。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于大肠杆菌蛋白高密度发酵，具体涉及一种两阶段培养基混合流加发酵方法。

技术介绍

1、大肠杆菌蛋白高密度发酵表达一般分为诱导前和诱导后两阶段，一般诱导前为菌体快速生长期，积累菌体量；而诱导后为蛋白快速合成期，积累目的蛋白。而菌体生长时需求的培养基营养较简单，而蛋白表达时需要丰富的氮源以及特殊的氨基酸提供底物。如宋建民，何凯红等的文献提到碳氮源平衡流加策略提高大肠杆菌表达融合型乳酸片球菌素时，随着菌体生长时碳氮比逐渐升高趋势，而产目的蛋白时碳氮比又变较低。即补料中的碳氮比及物料配方较重要，另外，目前诱导前后，采用的补料较单一，且补料的研究更多的关注补料方式，如蔡谨、孙章辉等的综述文献“补料发酵工艺的应用及研究进展”，较少关注采用两种补料交替补料方式，有机氮源除含丰富氮源，各种氨基酸，还含有维生素、微量元素等，工业大量投料使用有机氮源时，成本也较高，且含有的各种未知组分高浓度时容易导致发酵抑制。通过两阶段培养基混合流加可以通过平衡碳氮比、平衡有机氮源及无机氮源的流加配比，而利于降低成本，避免抑制，为此，我们提出了一种两阶段培养基混合流加发酵方法。...

【技术保护点】

1.一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述S1中PH数值调控范围为6.5-7.5。

3.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述S3中PH升高数值为1-2。

4.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述S4中PH数值为6.5-7.2。

5.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述S1中设置温度为34-38℃。

6.根据权利要求1所述的一种两阶段...

【技术特征摘要】

1.一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述s1中ph数值调控范围为6.5-7.5。

3.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述s3中ph升高数值为1-2。

4.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述s4中ph数值为6.5-7.2。

5.根据权利要求1所述的一种两阶段培养基混合流加发酵方法，其特征在于：所述s1中设置温度为34-38...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖其磊，陈攀，黄宇，袁琦，夏炜铠，
申请(专利权)人：湖北广济药业生物技术研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：