CAR/TCR拷贝数定量参考品及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种CAR/TCR拷贝数定量参考品及其制备方法和应用。该参考品由WPRE基因质粒和POP4基因质粒组成。本发明专利技术利用WPRE和POP4两个基因质粒作为CAR或TCR基因拷贝数的定量检测的参考品，一方面利用WPRE基因代替CAR/TCR等目的基因构建质粒参考品计算目的基因拷贝数，利用POP4作为参考基因构建质粒参考品计算总细胞数，因此本发明专利技术的参考品可通用于基于WPRE框架序列的所有T细胞免疫治疗产品的CAR/TCR拷贝数检测，为基于CAR/TCR的T细胞免疫治疗行业提供通用的、高质量的质量控制参考品。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测，具体涉及car/tcr拷贝数定量参考品及其制备方法和应用。

技术介绍

1、car-t细胞免疫疗法因其在白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤等多种恶性肿瘤疾病的治疗中展现出显著的治疗效果而成为国内外研究的热点，目前全球已有四款获fda批准上市的car-t细胞药物：kymriah、yescarta、tecartus和breyanzi。随着越来越多的car-t细胞产品进入临床研究和上市申请阶段，car-t细胞产品的质量控制问题也越来越受到行业的关注。

2、car-t和tcr-t都属于比较主流的特异性免疫细胞治疗，且细胞来源相同，均来自外周血单核细胞（pbmc）、自体或同种异体细胞。两种疗法都是通过将目的基因构建到慢病毒或逆转录病毒载体中，然后进行病毒感染t细胞试验，进而获得car-t或tcr-t细胞的。这些载体基因整合在t细胞基因组中，一方面显示有t细胞进行了car或tcr基因修饰，一方面又是一个安全性指标，可能会因整合而带来原癌基因的激活或抑癌基因的失活等造成二次肿瘤的风险。尽管现在载体的设计已经大大降低了整合的风险，但这种风险仍未本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.CAR/TCR拷贝数定量参考品，其特征在于，由WPRE基因质粒和POP4基因质粒组成。

2.如权利要求1所述的CAR/TCR拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的WPRE基因质粒的骨架为PN0014质粒，所述的POP4基因质粒的骨架为PUC57-KAN质粒。

3.如权利要求1所述的CAR/TCR拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的WPRE基因质粒和POP4基因质粒均为单酶切线性化质粒，且线性化位点处于质粒骨架上。

4.如权利要求1所述的CAR/TCR拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的WPRE基因质粒的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述的P...

【技术特征摘要】

1.car/tcr拷贝数定量参考品，其特征在于，由wpre基因质粒和pop4基因质粒组成。

2.如权利要求1所述的car/tcr拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的wpre基因质粒的骨架为pn0014质粒，所述的pop4基因质粒的骨架为puc57-kan质粒。

3.如权利要求1所述的car/tcr拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的wpre基因质粒和pop4基因质粒均为单酶切线性化质粒，且线性化位点处于质粒骨架上。

4.如权利要求1所述的car/tcr拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的wpre基因质粒的核苷酸序列如seq id no.3所示；所述的pop4基因质粒的核苷酸序列如seq id no.4所示。

5.如权利要求1所述的car/tcr拷贝数定量参考品，其特征在于，所述的wpre基因质粒和pop4基因质粒...

【专利技术属性】
技术研发人员：郭彦飞，钱依纯，许蓓，
申请(专利权)人：浙江健新原力制药有限公司，
类型：发明
国别省市：