【技术实现步骤摘要】
本申请属于成纤维细胞分离培养，具体涉及一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法。
技术介绍
1、成纤维细胞是一种具有组织异质性的间充质细胞，通过产生复杂的细胞外基质，并通过生物物理和生化线索创造信号生态位，参与组织的动态平衡和疾病。皮肤成纤维细胞是成纤维细胞类群之一，作为细胞生物学与医学研究中的重要细胞系之一，其原代细胞主要来源于捐献者的完整皮肤组织，通过对完整皮肤组织使用胶原酶进行消化，使内皮细胞如成纤维细胞分离，接种于适宜培养基中进行培养，从而得到皮肤成纤维细胞。
2、现有皮肤成纤维细胞分离主要存在两种方法，一是组织块培养法，主要是将剪碎的皮肤组织直接铺于培养皿底部，或者皮肤组织经消化酶分散后将真皮组织与表皮分离，将真皮碎组织块贴壁后进行培养；二为酶消化培养法，将剪碎的皮肤组织用胶原酶消化直接得到成纤维细胞，或者经过分散酶和胰蛋白酶消化，然后将混合物过滤，对得到的细胞悬液进行培养，分离成纤维细胞。其中，组织块培养法利用组织边缘细胞缓慢迁移的过程，培养分离成纤维细胞时，由于在2d培养平面中接触面积仅限组织的边缘部位，所以整体...
【技术保护点】
1.一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述将消毒后的皮肤组织浸入胶原酶溶液中还可以包括前处理，使用中性蛋白酶溶液消化消毒后的皮肤组织，消化后去除表皮组织；将消化后去除表皮组织后的真皮组织浸入胶原酶溶液中。
3.根据权利要求2所述的一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述中性蛋白酶溶液为HBSS配制的2DMC U/mL中性蛋白酶AF溶液；所述中性蛋白酶溶液消化的消化条件为2～8℃过夜消化12～20h。
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【技术特征摘要】
1.一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述将消毒后的皮肤组织浸入胶原酶溶液中还可以包括前处理，使用中性蛋白酶溶液消化消毒后的皮肤组织，消化后去除表皮组织；将消化后去除表皮组织后的真皮组织浸入胶原酶溶液中。
3.根据权利要求2所述的一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述中性蛋白酶溶液为hbss配制的2dmc u/ml中性蛋白酶af溶液；所述中性蛋白酶溶液消化的消化条件为2～8℃过夜消化12～20h。
4.根据权利要求1-3任一所述的一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述方法还包括：
5.根据权利要求4所述的一种皮肤成纤维细胞的酶消化分离培养方法，其特征在于，所述原代培养过程添加有成...
【专利技术属性】
技术研发人员：周伸奥，周丽，张琴，杨昊，温孟楠，
申请(专利权)人：椎元医学技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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