一种5-氨基乙酰丙酸生产菌株及其构建方法与应用技术

技术编号:41448207 阅读:23 留言:0更新日期:2024-05-28 20:38
本发明专利技术提供了一种5‑氨基乙酰丙酸生产菌株及其构建方法与应用,所述菌株上调了aceF、pykF、icd、gdhA、gltx、hemA、hemL、rhtA基因,通过BBa_J23113启动子下调hemB基因,异源表达了来源于Neurospora crassa的NCU05151基因,同时携带了上述高拷贝质粒pETJAL,所述质粒上表达了E.coli W3110的aspC、thrA<supgt;fbr</supgt;、thrB、thrC、asd、tdh、itaE基因和来源于Rhodobactersphaeroides的alaS基因;所述菌株实现了5‑氨基乙酰丙酸的高效生产,具有优秀的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物技术与发酵工程,尤其是一种5-氨基乙酰丙酸生产菌株及其构建方法与应用


技术介绍

1、5-氨基乙酰丙酸(c5o3nh9)是一种非蛋白氨基酸,是生物体合成叶绿素、血红素和维生素b12等吡咯类化合物的共同前体物质,广泛存在于微生物和动植物细胞中,在医药、农业、保健、化工等行业具有重要应用。

2、目前5-氨基乙酰丙酸合成方法主要为化学合成法和微生物发酵法。化学合成法存在环境污染较大,转化率较低的问题,此方法使用大量的酸碱试剂及有机试剂,存在提取困难、污染严重、价格昂贵等问题,无法满足生产的需求。微生物发酵法是以葡萄糖作为微生物生长的能量来源。然而目前,以葡萄糖为底物微生物合成5-氨基乙酰丙酸,需添加中间物质,生产成本高,发酵周期长,糖转化效率低,并且产量较低,不利于工业化生产。因此,开发一种不添加中间物质,以葡萄糖为底物,廉价、高效生产5-氨基乙酰丙酸基因工程菌具有重要的生产实践价值。


技术实现思路

1、本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种5-氨基乙酰丙酸生产菌株。

2本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种质粒,其特征在于:为质粒pETJAL,由质粒pET28a改造而来,携带有aspC、thrAfbr、thrB、thrC、asd、tdh、itaE基因和来源于Rhodobactersphaeroides的alaS基因,所述质粒pET28a的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.10所示。

2.一种5-氨基乙酰丙酸生产菌株,其特征在于:上调了aceF、pykF、icd、gdhA、gltx、hemA、hemL、rhtA基因,通过BBa_J23113启动子下调hemB基因,异源表达了来源于Neurospora crassa的NCU05151基因,同时携带了权利要求1所述质粒pE...

【技术特征摘要】

1.一种质粒,其特征在于:为质粒petjal,由质粒pet28a改造而来,携带有aspc、thrafbr、thrb、thrc、asd、tdh、itae基因和来源于rhodobactersphaeroides的alas基因,所述质粒pet28a的核苷酸序列如序列表seq id no.10所示。

2.一种5-氨基乙酰丙酸生产菌株,其特征在于:上调了acef、pykf、icd、gdha、gltx、hema、heml、rhta基因,通过bba_j23113启动子下调hemb基因,异源表达了来源于neurospora crassa的ncu05151基因,同时携带了权利要求1所述质粒petjal,所述质粒上表达了e.coli w3110的aspc、thrafbr、thrb、thrc、asd、tdh、itae基因和来源于rhodobactersphaeroides的alas基因。

3.根据权利要求2所述的5-氨基乙酰丙酸生产菌株,其特征在于:以e.coli w3110作为底盘菌株,利用bba_j23113启动子下调hemb基因,并整合在基因组ygay基因位点;利用trc启动子强化acef基因,并整合在基因组ylbe基因位点;利用trc启动子强化pykf基因,并整合在基因组gapc基因位点;利用trc启动子强化icd基因,并整合在基因组rph基因位点;利用trc启动子强化gdha基因,并整合在基因组yeel基因位点;利用trc启动子强化gltx基因,并整合在基因组ycgh基因位点;利用trc启动子强化heml基因,并整合在基因组yjgx基因位点;利用trc启动子强化hema基因,并整合在基因组mbha基因位点;利用trc启动子强化rhta基因,并整合在基因组yeep基因位点;利用trc启动子强化了来源于neurospora crassa or74a的ncu05151基因转录,并整合到基因组ycdn基因位点。

4.根据权利要求3所述的5-氨基乙酰丙酸生产菌株,其特征在于:所述e.coliw3110为e.coliw3110 atcc 27325。

5.根据权利要求2或3所述的5-氨基乙酰丙酸生产菌株,其特征在于:所述acef基因的核苷酸序列如序列表seq id no.1所示,pykf基因的核苷酸序列如序列表seq id no.2所示,icd基因的核苷酸序列如序列表seq id no.3所示,gdha基因的核苷酸序列如序列表seqid no.4所示,gltx基因的核苷酸序列如序列表seq id no.5所示,hema基因的核苷酸序列如序列表seq id no.6...

【专利技术属性】
技术研发人员:徐庆阳刘样豪魏翔
申请(专利权)人:天津科技大学
类型:发明
国别省市:

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