一种禽细小病毒的可视化核酸检测方法及其试剂盒技术

技术编号:41447348 阅读:16 留言:0更新日期:2024-05-28 20:37
本发明专利技术属于基因工程检测技术领域,具体涉及一种禽细小病毒的可视化核酸检测方法及其试剂盒。本发明专利技术通过提取病死鸭的病料DNA,鉴别出了一种禽细小病毒AAV‑2020,并提供了该毒株的检测方法,以LAMP结合CRISPR/LbCas12a系统对AAV‑2020这一禽细小病毒进行检测,操作简单,灵敏度高,特异性强,且结果可视化。据实施例记载,本发明专利技术以LAMP‑CRISPR/LbCas12a检测体系检测该禽细小病毒,且经过LbCas12a酶切反应结果显示,LAMP‑CRISPR/LbCas12a检测体系仅能特异性检测到该新型禽细小病毒基因的重组质粒,检测灵敏性为2copies/μL。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程检测,具体涉及一种禽细小病毒的可视化核酸检测方法及其试剂盒


技术介绍

1、细小病毒科是一个单链dna病毒家族,包含感染脊椎动物的细小病毒亚科和感染无脊椎动物的浓核病毒亚科;现在广泛认为的禽类易受感染的细小病毒为腺相关病毒(adeno-associatedvirus,aav)、鸡细小病毒(chickenparvovirus,chpv)、鹅细小病毒(gooseparvovirus,gpv)、新型鹅细小病毒(newgooseparvovirus,ngpv)以及番鸭细小病毒(muscovyduckparvovirus,mdpv)。这些病毒会感染鸡、鸭、鹅等禽类,使禽类生物发病,严重危害禽类的健康和发育,为禽类的养殖带来了严重影响。

2、目前,禽细小病毒的检测方法主要包括组织病理学切片、中和试验、间接elisa、普通pcr检测、实时荧光定量pcr和核酸探针方法等。其中,组织病理学切片、中和试验和间接elisa这类方法耗时繁琐,且准确度、灵敏度不高,很难达到普及;普通pcr检测和实时荧光定量pcr的检测灵敏度较低,通常只能用于实验室本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种禽细小病毒AAV-2020的基因组,其特征在于,所述基因组的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

2.一种sgRNA,其特征在于,所述sgRNA依据权利要求1所述基因组中的Cap基因AAV-4序列为模板设计得到。

3.根据权利要求2所述的sgRNA,其特征在于,所述sgRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.22所示。

4.一种CRISPR/LbCas12a检测体系,其特征在于,所述CRISPR/LbCas12a检测体系包括LbCas12a蛋白和权利要求2或3所述的sgRNA。

5.一种检测权利要求1所述禽细小病毒AAV-2020...

【技术特征摘要】

1.一种禽细小病毒aav-2020的基因组,其特征在于,所述基因组的核苷酸序列如seqid no.1所示。

2.一种sgrna,其特征在于,所述sgrna依据权利要求1所述基因组中的cap基因aav-4序列为模板设计得到。

3.根据权利要求2所述的sgrna,其特征在于,所述sgrna的核苷酸序列如seq id no.22所示。

4.一种crispr/lbcas12a检测体系,其特征在于,所述crispr/lbcas12a检测体系包括lbcas12a蛋白和权利要求2或3所述的sgrna。

5.一种检测权利要求1所述禽细小病毒aav-2020的核酸的lamp-crispr/lbcas12a体系,其特征在于,所述lamp-crispr/lbcas12a体系包括lamp扩增引物和权利要求4所述的crispr/lbcas12a检测体系;

6.根据权利要求5所述的检测体系,其特征在于,所述lamp扩增引物包括如下引物:

...

【专利技术属性】
技术研发人员:龚萍叶胜强杨宇陈倩红谢胜松钱运国杨永平陈星王丽霞童新红李中心翟明丽杜康裕
申请(专利权)人:武汉市农业科学院
类型:发明
国别省市:

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1