一种富马酸酶突变体及应用制造技术

本发明专利技术属于生物工程技术领域，公开了一种富马酸酶突变体及应用。本发明专利技术的富马酸酶突变体由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的富马酸酶中第108位、第222位、第323位中的至少一个位点进行突变而得。本发明专利技术通过对米根霉来源的富马酸酶进行分子改造，获得高底物亲和力的突变酶，其与苹果酸底物的结合力强，进而促进富马酸酶催化苹果酸转化成富马酸，实现富马酸酶的单向催化苹果酸转换成富马酸。本发明专利技术解决了富马酸酶催化效率低的问题，为其工业化应用奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，具体涉及一种富马酸酶突变体及应用。

技术介绍

1、富马酸是重要的四碳有机酸，作为一种潜在的平台化学品，在食品、制药、生物聚合物、涂料、绿色溶剂和增塑剂中有广泛的应用。现有技术报道的用于生产富马酸的方法是顺酐(又称马来酸酐)异构法。此外，生产富马酸的工艺还包括:糠醛氧化法、马来酸酶催化异构法、假丝酵母发酵法以及生物质原料发酵法等，上述方法都未能实现富马酸最大得率，据相关文献报道，还原tca途径是富马酸最大得率的实现途径，而富马酸酶(fumr)的最大酶活力是保证其高效合成的关键。整个tca胞质循环反应中限速反应的最大酶活力对促进丁二酸的生成具有重要作用。然而，富马酸酶的酶活力较低，催化效率低是阻碍其广泛生产的主要因素之一。为了更好的适应工业化的需求，实现丙酮酸羧化酶和苹果酸脱氢酶对富马酸前体苹果酸的持续供应，富马酸酶在相同的生产条件下，必须具有更高的酶活和充分的稳定性。

2、现有技术中，kang以紫外和y射线诱变米根霉，筛选获得了一株富马酸产量提升1.9倍的突变株，5l发酵罐水平为32.1g/l。闻建平等利用飞秒激光诱变技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种富马酸酶突变体，其特征在于，由氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的富马酸酶中第108位、第222位、第323位中的至少一个位点进行突变而得。

2.根据权利要求1所述的富马酸酶突变体，其特征在于，所述突变为以下至少一种：

3.一种编码权利要求1所述富马酸酶突变体的核酸。

4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，其核苷酸序列为SEQ ID NO:2-7中所示的任意一种。

5.一种重组质粒，其特征在于，包括如权利要求3所述的核酸。

6.根据权利要求5所述的重组质粒，其特征在于，其骨架载体为pET表达载体。

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【技术特征摘要】

1.一种富马酸酶突变体，其特征在于，由氨基酸序列如seq id no:1所示的富马酸酶中第108位、第222位、第323位中的至少一个位点进行突变而得。

2.根据权利要求1所述的富马酸酶突变体，其特征在于，所述突变为以下至少一种：

3.一种编码权利要求1所述富马酸酶突变体的核酸。

4.根据权利要求3所述的核酸，其特征在于，其核苷酸序列为seq id no:2-7中所示的任意一种。

5.一种重组质...

【专利技术属性】
技术研发人员：李娟，陈平绪，叶南飚，曹民，曾祥斌，陈美琪，
申请(专利权)人：金发科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：