无色绿藻4-脯氨酸羟化酶在制备羟基化修饰的重组胶原蛋白中的应用制造技术

技术编号：41446880 阅读：89 留言：0更新日期：2024-05-28 20:37

本发明专利技术公开了无色绿藻4‑脯氨酸羟化酶在制备羟基化修饰的重组胶原蛋白中的应用。本发明专利技术研究得到一种来自无色绿藻(Polytomella parva)的4‑脯氨酸羟化酶Pp‑P4H，可在毕赤酵母表达系统中制备羟基化修饰的重组胶原蛋白。研究显示，将Pp‑p4h基因与类人三型胶原蛋白基因col3a1共转化毕赤酵母，得到的毕赤酵母转化菌株能够高水平表达重组胶原蛋白，其摇瓶表达水平为197mg/L，并且每千克粗胶原蛋白中羟脯氨酸的含量为377.6mg，表明该酶在酵母表达系统中可以有效地羟基化修饰重组胶原蛋白。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程。更具体地，涉及无色绿藻4-脯氨酸羟化酶在制备羟基化修饰的重组胶原蛋白中的应用。

技术介绍

1、4-脯氨酸羟化酶(prolyl 4-hydroxylase，p4h)是一类重要的依赖亚铁离子和2-酮戊二酸的氧化酶，广泛存在于真核生物和部分原核生物中。该酶以亚铁离子作为辅因子，在氧气的参与下，可羟基化修饰含有脯氨酸的多肽底物，同时对辅因子2-酮戊二酸进行脱羧，生成琥珀酸和二氧化碳。p4h催化的羟基化反应在多种生命过程中发挥重要作用，如参与核酸分子的修复、调节相关基因的转录和翻译，参与植物和细菌生长过程中次级代谢产物和信号分子的生物合成等。尤其值得关注的是，p4h也参与了脊椎动物胶原蛋白的合成，因此在利用生物技术生产重组胶原蛋白中具有重要的应用前景。

2、胶原蛋白(collagen)是一种细胞外基质蛋白，是人体及动物细胞壁中含量最丰富的蛋白质。特别是在皮肤细胞中，胶原蛋白可以占到细胞干重的四分之三。成熟的胶原蛋白中含有丰富的三股螺旋折叠结构，可以稳定胶原蛋白的整体结构，使胶原蛋白具有良好的拉伸强度。此外，胶原...

【技术保护点】

1.无色绿藻(Polytomella parva)4-脯氨酸羟化酶在制备羟基化修饰的重组胶原蛋白中的应用，其特征在于，所述4-脯氨酸羟化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.无色绿藻(Polytomella parva)4-脯氨酸羟化酶在制备4-脯氨酸羟化酶和/或重组胶原蛋白表达载体中的应用，其特征在于，所述4-脯氨酸羟化酶的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。

3.一种重组共表达载体，其特征在于，含有无色绿藻(Polytomella parva)4-脯氨酸羟化酶编码基因Pp-p4h和类人三型胶原蛋白基因col3a1。