积雪草叶片原生质体提取方法技术

本发明专利技术公开了一种积雪草叶片原生质体提取方法，包括以下步骤：1)摘取嫩绿肥厚的积雪草叶片置于浓度为0.6mol/L的甘露醇溶液中浸泡；2)从甘露醇溶液中取出叶片，吸干水分，切成丝状物，置于混合酶液中酶解处理；3)向酶解完成的混合液中加入等体积的CPW洗液，混匀，用无菌滤网过滤除去未酶解完全的植物组织及细胞团，取滤液，将滤液离心，除去上清液，得沉淀；4)向沉淀中再次加入等体积的CPW洗液重悬，离心，收集细胞沉淀得积雪草叶片原生质体。本发明专利技术能够提高积雪草叶片原生质体的提取产量和原生质体活力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物原生质体。更具体地说，本专利技术涉及一种积雪草叶片原生质体提取方法。

技术介绍

1、积雪草centella asiatica(l.)urban.为伞形科积雪草属草本植物，其干燥全草入药，最早被我国《神农本草经》一书所收载，在我国已有两千多年的用药历史。据《中华人民共和国药典》(2020年版)记载：积雪草味苦、辛，性寒，具有清热利湿，解毒消肿等功效，用于湿热黄疸，痈肿疮毒等症，为我国传统常用中药材。积雪草在医药、保健食品和美容等领域已得到广泛的应用，吸引了众多企业生产，市场前景广阔，也成为研究者关注的热点。

2、植物原生质体被视为理想的遗传研究、植物育种材料，利用原生质体培养技术，可使原生质体再生成完整植株。目前，原生质体培养技术已应用于一些木本植物，获得了再生植物。现代研究常用酶解法进行原生质体的提取制备，去掉植物细胞壁。但是，植物组织因植物品种、发育程度等不同具有不同的细胞壁厚度和液泡渗透压，在酶解时，如酶解方法不当很容易使原生质体的细胞活性降低，影响细胞的活性和产量。因此，探究积雪草叶片原生质体的制备方法很有必要，为提高积本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.积雪草叶片原生质体提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述积雪草叶片原生质体提取方法，其特征在于，酶解时，将积雪草丝状物与混合酶液置于25～26℃黑暗环境，40-60r/min摇床震荡酶解4～8h。

3.如权利要求2所述积雪草叶片原生质体提取方法，其特征在于，所述混合酶液使用前，进行配制：先配置含1％～3％纤维素酶R-10、0.25％～1％离析酶R-10、0.1％果胶酶Y-23、2.5mmol/L KH2PO4、0.5mol/L甘露醇、8mmol/L CaCl2和15mmol/L KCl的混合液，然后将混合液于55℃水浴锅中活化10min，冷...

【技术特征摘要】

1.积雪草叶片原生质体提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.如权利要求1所述积雪草叶片原生质体提取方法，其特征在于，酶解时，将积雪草丝状物与混合酶液置于25～26℃黑暗环境，40-60r/min摇床震荡酶解4～8h。

3.如权利要求2所述积雪草叶片原生质体提取方法，其特征在于，所述混合酶液使用前，进行配制：先配置含1％～3％纤维素酶r-10、0.25％～1％离析酶r-10、0.1％果胶酶y-23、2.5mmol/l kh2po4、0.5mol/l甘露醇、8mmol/l cacl2和15mmol/l kcl的混合液，然后将混合液于55℃水浴锅中活化10min，冷却到室温后，再加入0.1％bsa和0.05％纤维蛋白原溶液，调节ph至5.7，经过0.45μm微孔滤膜过滤灭菌，再加入0.5％～1％壳聚糖，混合，放置于4℃保藏备用；其中，所述纤维蛋白原溶液通过将纤维蛋白原加入37℃的0.9％氯化钠溶液中配置得到，纤维蛋白原与0.9％氯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷明，张占江，李倩，谭桂玉，李翠，潘丽梅，陈晓英，覃雅，韦树根，万凌云，李林轩，张坤，霍娟，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：