一种表达外膜孔蛋白OmpPst1以加速电子传递速率的重组希瓦氏菌构建方法技术

本发明专利技术公开了一种高效合成与分泌电子传递载体的重组希瓦氏菌株构建方法及用途，方法如下：1）从Providencia stuartii 99645的基因组上PCR扩增获得外膜孔蛋白基因ompPst1并将基因序列优化；2）选择适宜的启动子lacUV5与RBS序列，将外膜孔蛋白基因ompPst1与pHG13连接得到质粒pHG13‑ompPst1；4）将获得的质粒导入吩嗪‑1‑羧酸合成希瓦氏菌SO3（实验室前期构建，能够合成电子传递载体吩嗪‑1‑羧酸）中，得到高效合成与分泌电子传递载体的重组希瓦氏菌株SP2。本发明专利技术构建的重组希瓦氏菌株SP2提高了细胞膜的通透性，促进了吩嗪‑1‑羧酸的外排，进而增强胞外电子传递速率，最大功率密度为2135.7 mW/m2，是对照菌株MR‑1的24.4倍。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于电活性微生物胞外间接电子传递的研究领域，具体涉及一种表达   providencia stuartii源外膜孔蛋白omppst1提细胞通透性以加速电子传递载体吩嗪-1-羧酸分泌，从而提高电子传递速率的重组希瓦氏菌构建方法。

技术介绍

1、随着人口激增与工业快速发展，能源短缺与环境污染已逐渐成为当今人类面临的主要问题。为此，研究人员在开发新的可持续和环保的能源资源方面做出了重大努力。生物电化学系统，特别是微生物燃料电池(microbial fuel cell, mfc)，它可以通过微生物代谢从有机废物中获取能量，近几十年来作为一种潜在的清洁能源生产方法引起了广泛关注。

2、但是细胞膜与电极之间低的电子传递效率阻碍了mfc的实际应用，氧化还原活性介质被广泛应用于mfc中以提高功率性能。这些可溶性电子载体加速了电子从微生物向阳极转移的速率，从而显著提高了mfc的电流和功率密度输出。 shewanella oneidensis mr-本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高效分泌电子传递载体的重组希瓦氏菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将来自Providencia stuartii外膜孔蛋白基因ompPst1连接到载体pHG13，选择适宜启动子与RBS序列，构建表达载体pHG13- ompPst1，通过结合转移将其转入SO3（合成吩嗪-1-羧酸希瓦氏菌，实验室前期构建），得到重组希瓦氏菌株SP2。

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，利用PCR的方法从Providencia stuartii 99645的基因组上扩增得到外膜孔蛋白基因ompPst1。

3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述外膜孔蛋...

【技术特征摘要】

1.一种高效分泌电子传递载体的重组希瓦氏菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将来自providencia stuartii外膜孔蛋白基因omppst1连接到载体phg13，选择适宜启动子与rbs序列，构建表达载体phg13- omppst1，通过结合转移将其转入so3（合成吩嗪-1-羧酸希瓦氏菌，实验室前期构建），得到重组希瓦氏菌株sp2。

2.根据权利要求1所述构建方法，其特征在于，利用pcr的方法从providencia stuartii 99645的基因组上扩增得到外膜孔蛋白基因omppst1。

3.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述外膜孔蛋白基因omppst1的扩增引物包括seq id no.1~2。

4.根据权利要求2所述构建方法，其特征在于，所述扩增的程序优选包括:95℃预变性5min；95℃变性30s，53℃退火30s，72℃延伸1kb/30s，30个循环；72℃彻底延伸5min；16℃降温5min。

【专利技术属性】
技术研发人员：宋浩，张保财，王忆芸，李锋，石思程，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：