【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于酶工程，特别涉及了一种使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法。
技术介绍
1、如化合物iv所示的七环手性胺是多种临床阶段药物的手性前体，其现有的合成方法是用非手性硝基化合物通过还原胺化，再依赖化学拆分得到。上述方法原子经济性较低、价格较高，且远端手性收率非常低(收率<30％)。目前针对r构型的七环并苯基手性胺没有天然酶或已报道的人工酶可以合成。
2、
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术中七环手性胺的制备方法收率低的缺陷，为此提供一种使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法。本专利技术利用特定的氨基转移酶或其突变体，以七环酮类化合物为原料制备得到单一构型的七环手性胺，具有如下一个或多个优点：立体选择性好、收率高和纯度高。
2、本专利技术是通过以下技术方案来解决上述技术问题的。
3、本专利技术提供了一种使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其包含以下步骤：在氨基转移酶或其突变体，以及辅酶的存在下，将化合物iii和氨基供体进行胺化反应，得到化合物iv即可；
4、
5、其中，“*”表示其标注的碳原子的构型为r构型；
6、pg为氨基保护基；
7、所述的辅酶为所述氨基转移酶或其突变体的辅酶；
8、所述的氨基转移酶的氨基酸序列如seq id no:1所示；
9、所述的突变体为在如seq id no:1所示的氨基酸序列上具有选自以下一个或多个
10、某一实施方案中，所述的差异可为缺失、增加或替换，优选为替换。
11、某一实施方案中，所述突变体为在如seq id no:1所示的氨基酸序列的第1位氨基酸残基替换为f、l、n或q，和/或，第2位氨基酸残基替换为l或r，和/或，第3位氨基酸残基替换为k、p、t或y，和/或，第4位氨基酸残基替换为a、l、q或r，和/或，第5位氨基酸残基替换为h、l、m、p、s或w，和/或，第6位氨基酸残基替换为a、c、e、f、h或y，和/或，第7位氨基酸残基替换为a、d、e、p、r或v，和/或，第8位氨基酸残基替换为h、k、m、r或t，和/或，第9位氨基酸残基替换为a或i，和/或，第11位氨基酸残基替换为g或n，和/或，第14位氨基酸残基替换为h、m或y，和/或，第15位氨基酸残基替换为p，和/或，第16位氨基酸残基替换为h、i、q或v，和/或，第17位氨基酸残基替换为p、s或y，和/或，第19位氨基酸残基替换为a、c、l、s或y，和/或，第21位氨基酸残基替换为t，和/或，第25位氨基酸残基替换为h、m、p、r、v或w，和/或，第28位氨基酸残基替换为k、n或y，和/或，第29位氨基酸残基替换为m或q，和/或，第32位氨基酸残基替换为a、e、l、p、t或v，和/或，第33位氨基酸残基替换为f、k、q、r、s或v，和/或，第34位氨基酸残基替换为a、i或k，和/或，第35位氨基酸残基替换为g或v，和/或，第37位氨基酸残基替换为m、t或w，和/或，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其包含以下步骤：在氨基转移酶或其突变体，以及辅酶的存在下，将化合物III和氨基供体进行胺化反应，得到化合物IV即可；
2.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的差异为缺失、增加或替换，优选为替换。
3.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述突变体为在如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列上具有选自以下一个或多个位点的氨基酸残基的差异：
4.如权利要求3所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述突变体为在如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列上具有3～14个位点的氨基酸残基的差异，例如具有4～14个位点的氨基酸残基的差异。
5.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的突变体为在如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列上至少具有选自以下1个、2个或3个位点的氨基酸残基的差异：第60位、第86位和第442位，优选为第60位氨基酸残基替换为N、第86位
6.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的突变体在如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列上的差异如下表所示：
7.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法满足以下条件的一种或多种：
8.如权利要求7所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法满足以下条件的一种或多种：
9.如权利要求1-8任一项所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，其还进一步包含以下步骤：在溶剂中，在碱的存在下，如式II所示的化合物与氨基保护剂进行氨基保护反应，得到所述化合物III，即可：
10.如权利要求9所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，其满足以下条件的一种或多种：
11.如权利要求9所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的制备手性胺的方法还进一步包含以下步骤：在辅酶的存在下，所述如式I所示的化合物在酶的作用下进行还原反应，得到如式II所示的化合物，即可：
12.一种氨基转移酶突变体，其为如权利要求1-8任一项所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法中的氨基转移酶突变体。
13.一种分离的核酸，其中所述核酸编码如权利要求12所述的氨基转移酶的突变体。
14.一种重组表达载体，其中所述重组表达载体包含如权利要求13所述的核酸。
15.一种转化体，其中所述转化体包含如权利要求14所述的重组表达载体。
16.一种制备氨基转移酶突变体的方法，其包含以下步骤：培养如权利要求15所述的转化体并获得含氨基转移酶突变体的培养物，即可。
17.一种氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示的氨基转移酶或如权利要求12所述的氨基转移酶突变体在制备手性胺类化合物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其包含以下步骤：在氨基转移酶或其突变体，以及辅酶的存在下，将化合物iii和氨基供体进行胺化反应，得到化合物iv即可；
2.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的差异为缺失、增加或替换，优选为替换。
3.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述突变体为在如seq id no:1所示的氨基酸序列上具有选自以下一个或多个位点的氨基酸残基的差异：
4.如权利要求3所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述突变体为在如seq id no:1所示的氨基酸序列上具有3～14个位点的氨基酸残基的差异，例如具有4～14个位点的氨基酸残基的差异。
5.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的突变体为在如seq id no:1所示的氨基酸序列上至少具有选自以下1个、2个或3个位点的氨基酸残基的差异：第60位、第86位和第442位，优选为第60位氨基酸残基替换为n、第86位氨基酸替换为l和第442位氨基酸替换为i。
6.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的突变体在如seq id no:1所示的氨基酸序列上的差异如下表所示：
7.如权利要求1所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法，其特征在于，所述的使用氨基转移酶或其突变体制备手性氨的方法满足以下条件的一种或多种：
8.如权利要求7...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐佳，张亚楠，程鹏飞，孟枭，朱景仰，
申请(专利权)人：上海合全药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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