本发明专利技术属于生物工程技术领域，提供一种合成β‑胡萝卜素的工程菌及其构建方法和应用。本发明专利技术的合成β‑胡萝卜素的工程菌的构建方法，包括：(1)以钩虫贪铜菌H16为出发菌株，将来源于异常球菌DSM 21211的dxs基因以及来源于的农研丝杆菌GR20‑10的idi基因整合在钩虫贪铜菌基因组上，并替换钩虫贪铜菌基因组的phaCAB基因，得到H16‑1菌株；(2)敲除H16‑1菌株基因组上的lpdA基因和LDH基因，得到H16‑3菌株；(3)将GGPP合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶以及番茄红素β‑环化酶的基因转入H16‑3菌株，得到H16‑4菌株，即为合成β‑胡萝卜素的工程菌。本发明专利技术的工程菌在250ml发酵罐中利用二氧化碳生产β‑胡萝卜素的产量可达128.5mg/L，对于二氧化碳的利用以及β‑胡萝卜素的工业化生产具有重要的应用意义。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，涉及一种利用二氧化碳合成β-胡萝卜素的工程菌及其构建方法与应用。
技术介绍
1、β-胡萝卜素具有维生素原a的活性，负责类维甲酸的合成，在日常生活和工业生产中具有重要作用。目前，90％以上的商业化β-胡萝卜素是通过化学合成产生的。近年来，人们对微生物发酵生产天然类胡萝卜素的兴趣越来越大，到目前为止大部分微生物生产β-胡萝卜素都是以糖类作为碳源的，如果能找到一种更为廉价的碳源，则对β-胡萝卜素的工业化生产具有重要意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供一种利用二氧化碳为碳源合成β-胡萝卜素的钩虫贪铜菌(cupriavidus necator)工程菌。
2、在第一个方面，本专利技术提供一种合成β-胡萝卜素的工程菌的构建方法，包括步骤：
3、(1)以钩虫贪铜菌为出发菌株，优选地，出发菌株为钩虫贪铜菌h16(cupriavidusnecator h16)，将来源于异常球菌dsm 21211(deinococcus maricopensis dsm 21211)的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种合成β-胡萝卜素的工程菌的构建方法，包括步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述异常球菌DSM 21211来源的dxs基因的序列如SEQ ID NO:1第705位到第2567位所示，所述农研丝杆菌GR20-10来源的idi基因的序列如SEQ ID NO:1第2581位到第3123位所示，所述来源于成团泛菌的GGPP合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶以及番茄红素β-环化酶的基因序列分别如SEQ ID NO:8中第1位至第912位、第926位至第1816位、第1830位至第3308位和第3322位至第4482位所示。
>3.根据权利要求1...
【技术特征摘要】
1.一种合成β-胡萝卜素的工程菌的构建方法，包括步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其中，所述异常球菌dsm 21211来源的dxs基因的序列如seq id no:1第705位到第2567位所示，所述农研丝杆菌gr20-10来源的idi基因的序列如seq id no:1第2581位到第3123位所示，所述来源于成团泛菌的ggpp合成酶、八氢番茄红素合成酶、八氢番茄红素脱氢酶以及番茄红素β-环化酶的基因序列分别如seq id no:8中第1位至第912位、第926位至第1816位、第1830位至第3308位和第3322位至第4482位所示。
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其中，步骤(1)中，通过自杀型质粒介导的靶基因缺失策略将dxs和idi基因整合在钩虫贪铜菌h16基因组上替换phacab基因，得到h16-1菌株；优选地，步骤(1)为：将序列如seq id no:1所示的dxs-idi-phadoner片段和自杀型pk19mobsacb质粒连接得到pk19-dxs-idi-phadoner质粒，再将pk19-dxs-idi-phadoner质粒通过接合的方式转入钩虫贪铜菌h16，通过两次同源单交换筛选得到将异常球菌dsm21211来源的dxs基因以及来源于的农研丝杆菌gr20-10的idi基因整合在钩虫贪铜菌h16基因组上替换原有phacab基因的菌株，得到h16-1菌株。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的构建方法，其中，步骤(2)中，通过同源重组敲除h16-1菌株基因组上的lpda和ldh基因；
5.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：王嘉，王竞辉，姜君鹏，杨尚彤，
申请(专利权)人：万华化学集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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