病毒蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用技术

技术编号：41403186 阅读：2 留言：0更新日期：2024-05-20 19:28

本发明专利技术涉及病毒蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用。具体地，本发明专利技术的病毒蛋白提取保存试剂包含以下组分：电解质，其浓度为0.5～2.5w/v％，非离子表面活性剂，其浓度为0.01～1w/v％，增稠剂，其浓度为0.1～2w/v％，螯合剂，其浓度为5～50mmol/L，蛋白稳定剂，其浓度为0.1～2w/v％，生物防腐剂，其浓度为0.05～2w/v％，和溶剂。本发明专利技术还涉及制备病毒蛋白提取保存试剂的方法、病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用、病毒样本保存试剂盒、病毒蛋白的提取方法和病毒蛋白的保存方法。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外诊断领域。具体地，本专利技术涉及到一种病毒蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用，特别涉及通用型病毒n蛋白提取保存试剂、其制备方法和其应用。

技术介绍

1、各种病毒对人类健康、社会秩序和全球经济都产生了巨大危害。新型冠状病毒在潜伏期的隐蔽性高且传播性广，因此对感染人群和密切接触人群的早期、快速筛查成为预防和治疗的重要举措。为了满足目前新冠疫情防控形势的需求，降低新冠病毒核酸筛查的压力，实现对疑似患者和密切接触者的快速筛查，可通过检测患者鼻、咽拭子样本中新型冠状病毒抗原用于新型冠状病毒患者的辅助诊断，对是否携带新冠病毒抗原的检测成为重要的临床指标。为了提高检测的便携性，缓解医疗机构筛查压力，需要研发出能够快速进行新冠病毒抗原检测且对检测人员技术以及环境无特殊要求的简便的检测方法。

2、现有的较为成熟的新冠病毒的抗原检测方案主要有两种：

3、第一种方案基于荧光免疫层析法。检测时，首先进行取样，通常取受检人群的口、鼻咽拭子，之后放入新冠病毒提取试剂中，用手隔着采样管外壁挤压拭子头与提取试剂充分混匀，取适量混合液(通常为80-100ul)滴加到试纸条的加样孔。当样本中含有相应的待测物且浓度不低于最低检测限时，待测物会与预包被的荧光微球标记的抗体反应形成抗原-抗体复合物，随后复合物通过毛细作用向前层析，则在检测线处被抗体捕获聚集，通过免疫荧光分析仪产生的激发光激发被标记的抗原-抗体复合物产生荧光，并读出信号峰值，根据读出的数值对新冠病毒抗原阳性进行判定。如果样本中不含新冠病毒，则不会形成抗原-抗体复

4、第二种技术方案是基于胶体金法，检测原理与上述荧光免疫层析法相似。检测时，同样是取受检人群的口、鼻咽拭子，之后放入新冠病毒提取试剂中，将拭子头与提取试剂充分混匀，之后将混合液滴加到试纸条的加样孔处。当样本中含有相应的待测物且浓度不低于最低检测限时，样本待测物会与预包被的胶体金标记的抗体反应形成抗原-抗体复合物，随后复合物同样是通过毛细作用向前层析，在检测线处被抗体捕获聚集而显色，通过人眼观察即可判断新冠病毒抗原检测为阳性；如果样本中不含新冠病毒，则不会形成抗原-抗体复合物，检测线处不显色，证明样本为阴性。而无论样本中是否含有待测物质，质控线c处都应显色。而当观察到质控线c处没有显色时，表明层析过程异常，或者提取试剂失效，无论检测线t处是否显色，均不能判断待测样本的阴阳性。在此技术方案的流程中新冠病毒提取试剂对抗原蛋白的提取能力依然决定了检测的浓度下限，直接影响检测的效果，另外，其对试纸条预置的抗体及胶体金应无不良影响，同样也应避免产生假阳性。

5、目前广泛应用的是基于上述两种方案制备的含有荧光微球作为示踪标记物或胶体金颗粒标记新冠病毒抗原的特异性抗体的试纸条，利用病毒抗原与抗体特异的免疫结合原理来进行抗原筛查，此方法便捷且对进行检测的专业技术无特殊要求，适宜广大人群进行居家检测，但是检测的灵敏度要弱于核酸检测方法。而提高病毒抗原检测灵敏度的关键在于提高病毒抗原与抗体的结合能力。

6、因此，急需开发一种病毒蛋白提取保存试剂，其：首先需要具备兼容性，能同时应用于荧光免疫层析法和胶体金法两种检测技术方案中；其次需要具备高灵敏度，在以上两种技术方案中都能提高检测的准确性；第三需要具备高安全性，确保待测样本中的病毒在检测时能够迅速裂解失活以保证检测人员的安全；第四需要具备高稳定性，对抗原蛋白具有一定的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。

技术实现思路

1、因此，本专利技术的主要目的在于提供一种病毒蛋白提取保存试剂，特别是病毒n蛋白提取保存试剂，其能够在快速裂解新冠病毒的同时不破坏其蛋白结构，将抗原n蛋白充分暴露出来，同时提取液中的有效成分能够加强抗原与抗体的结合能力，并且适配于荧光免疫层析法或胶体金法检测试纸条，将大大提高检测的灵敏度以及应用价值，有助于对病毒抗原进行检测。另外，该提取保存试剂具有对蛋白的保存能力，可应用于样本的较长距离运输而不影响检测结果。本专利技术的病毒蛋白提取保存试剂对于实现对新冠病毒的早筛查、早发现、早治疗的防治理念，维护居民公共安全具有重要意义。

2、为了实现上述目的，根据本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种病毒蛋白提取保存试剂，试剂包含以下组分：电解质，其浓度为0.5～2.5w/v％，非离子表面活性剂，其浓度为0.01～1w/v％，增稠剂，其浓度为0.1～2w/v％，螯合剂，其浓度为5～50mmol/l，蛋白稳定剂，其浓度为0.1～2w/v％，生物防腐剂，其浓度为0.05～2w/v％；和溶剂。

3、进一步地，试剂的ph为5.5～8.5。

4、进一步地，溶剂为无机溶剂，优选为水，更优选为去离子水。

5、进一步地，电解质的浓度为1～2.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：1w/v％、1.2w/v％、1.4w/v％、1.6w/v％、1.8w/v％、2w/v％、2.2w/v％和2.4w/v％；并且电解质包含缓冲化合物，缓冲化合物选自磷酸盐缓冲液、tris缓冲液和hepes缓冲液。

6、进一步地，非离子表面活性剂的浓度为0.05～0.5w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％和0.5w/v％；非离子表面活性剂包括聚乙二醇辛基苯基醚、聚山梨酯类和乙基苯基聚乙二醇中的一种或多种，优选选自由以下各项组成的组：triton x-100、tween-20和np-40；更优选为np-40。

7、进一步地，增稠剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.4w/v％、0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％和0.8w/v％；并且增稠剂包括聚酪蛋白酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、海藻糖中的一种或多种，优选为酪蛋白酸钠和聚乙二醇20000。

8、进一步地，螯合剂的浓度为5～10mmol/l，优选选自由以下各项组成的组：5mmol/l、6mmol/l、7mmol/l、8mmol/l或9mmol/l；并且螯合剂为乙二胺四乙酸(edta)二钠盐。

9、进一步地，蛋白稳定剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.5w/v％、0.6w/v％、0.7w/v％、0.8w/v％、0.9w/v％和1w/v％；蛋白稳定剂为无蛋白酶牛血清白蛋白。

10、进一步地，生物防腐剂的浓度为0.1～1w/v％，优选选自由以下各项组成的组：0.1w/v％、0.2w/v％、0.3w/v％、0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种病毒蛋白提取保存试剂，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述试剂的pH为5.5～8.5。

3.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：所述溶剂为无机溶剂，优选为水，更优选为去离子水。

4.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

5.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

6.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

7.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

8.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

9.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于：

10.一种制备权利要求1-9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于：

12.根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用，其特征在于，

13.根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂在制备病毒样本保存试剂盒中的应用，其特征在于，所述试剂盒

14.一种病毒样本保存试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂或根据权利要求10或11所述的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂。

15.一种病毒蛋白的提取方法，其特征在于，使用根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂或根据权利要求10或11所述的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行提取。

16.一种病毒蛋白的保存方法，其特征在于，使用根据权利要求1至9中任一项所述的病毒蛋白提取保存试剂或根据权利要求10或11所述的方法制备的病毒蛋白提取保存试剂进行保存。

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【技术特征摘要】