多功能催化酶及突变体、多核苷酸、重组表达载体、其制备方法以及其应用技术

本发明专利技术提供了一种多功能喹啉酸磷酸核糖转移酶、编码该多功能催化酶的多核苷酸、重组表达载体、制备方法以及其在催化磷酸核糖转移、磷酸水解和核糖水解反应中任意一者中的应用。多功能酶包含与序列表中SEQ ID NO:2具有75％以上同一性的氨基酸序列，并且不仅可以识别喹啉酸底物形成烟酸核糖单磷酸(NAMN)，还能够进一步催化烟酸核糖单磷酸发生磷酸水解形成烟酸核糖及其核糖水解反应形成烟酸。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学技术和酶工程，特别涉及一种多功能催化酶、多核苷酸、重组表达载体、宿主细胞、其制备方法以及其应用。本专利技术尤其涉及一种喹啉酸磷酸核糖转移酶，优选来源于吡啶霉素链霉菌(streptomyces pyridomyceticus)b-2517的喹啉酸磷酸核糖转移酶pyrz及其突变体的基因，并提供了该酶的异源表达载体构建方法及其重组突变体的构建方法。

技术介绍

1、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，nad)是一种与生命活动紧密相关的重要辅因子，在生物体内参与dna修复、转录表达、细胞周期调控、物质能量代谢等多种生命过程，包括糖酵解、三羧酸循环、脂肪酸氧化、氧化磷酸化等。nad+也是非氧化还原nad+依赖酶如长寿因子去乙酰化酶(sirtuins)和多腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly(ado-ribose)polymerase)等的共底物，有效协调代谢和衰老。

2、nad+具有重要的生物学意义，不同生物体中nad+的生物合成途径也被广泛研究。nad+形成主要通过两种生物合成途径，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种多功能催化酶，其特征在于包含与序列表中SEQ ID NO:2具有75％以上同一性的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的多功能催化酶，其特征在于，所述氨基酸序列与序列表中SEQ IDNO:2具有80％以上，优选90％以上的同一性。

3.如权利要求1或2所述的多功能催化酶，其特征在于，所述氨基酸序列为序列表中SEQID NO:2所示的氨基酸序列。

4.一种多功能催化酶突变体，其特征在于，以序列表中SEQ ID NO:2为参考序列，该氨基酸序列具有位于第296位的定点突变。

5.如权利要求4所述的多功能催化酶突变体，其特征在于，序列表中S...

【技术特征摘要】

1.一种多功能催化酶，其特征在于包含与序列表中seq id no:2具有75％以上同一性的氨基酸序列。

2.如权利要求1所述的多功能催化酶，其特征在于，所述氨基酸序列与序列表中seq idno:2具有80％以上，优选90％以上的同一性。

3.如权利要求1或2所述的多功能催化酶，其特征在于，所述氨基酸序列为序列表中seqid no:2所示的氨基酸序列。

4.一种多功能催化酶突变体，其特征在于，以序列表中seq id no:2为参考序列，该氨基酸序列具有位于第296位的定点突变。

5.如权利要求4所述的多功能催化酶突变体，其特征在于，序列表中seq id no.2中第296位的天冬氨酸被修饰为下列中的至少一种氨基酸：谷氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、甘氨酸、半胱氨酸、组氨酸、精氨酸以及赖氨酸，优选谷氨酸。

6.如权利要求4到5中任意一项所述的多功能催化酶突变体，其特征在于，所述氨基酸序列为序列表中seq id no:4所示的氨基酸序列。

7.如权利要求1到3中任意一项所述的多功能催化酶，其特征在于，所述多功能催化酶衍生自吡啶霉素链霉菌(streptomyces pyridomyceticus)b-2517。

8.一种多核苷酸，其特征在于包含选自下列(i)和(ii)中任意一者的核苷酸序列：

9.如权利要求8所述的多核苷酸，其特征在于，所述核苷酸序列与序列表中seq id no:1具有8...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄婷婷，林双君，周子画，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：