本发明专利技术公开了蛋清蛋白水解物在治疗或者预防2型糖尿病中的应用，属于糖尿病防治领域。食源性生物活性肽是天然活性化合物代表之一，对心血管疾病、肥胖和糖尿病等营养相关慢性疾病具有干预作用。已有研究证明了蛋清衍生肽(EWP)对胰岛素抵抗大鼠葡萄糖耐量的改善作用。然而，其对2型糖尿病(T2DM)的干预作用及相关机制有待阐明。本申请提出了蛋清蛋白水解物在治疗或者预防2型糖尿病中的应用，揭示了EWP干预7周可显著降低T2DM小鼠的空腹血糖，其作用机制可能与抑制肝脏糖异生通路有关。肝脏非靶向代谢组学分析结果显示，EWP干预可改变T2DM小鼠的肝脏代谢谱，其中，脂肪酸羟基脂肪酸酯(FAHFAs)在介导EWP降糖作用中可能发挥关键作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及糖尿病防治领域，具体涉及蛋清蛋白水解物在治疗或者预防2型糖尿病中的应用。
技术介绍
1、近年来，2型糖尿病(type 2diabetes mellitus，t2dm)发病率不断上升，已成为全球公共卫生问题。目前，全球约有4亿成年t2dm患者。t2dm及其并发症已成为人类第9大死因。因此，为t2dm寻找高效、毒副作用低且经济的干预方案已成为必然。
2、由肝脏葡萄糖输出(hepatic glucose production，hgp)异常增多导致的糖代谢稳态失衡是t2dm发生的重要病理基础之一。由于化学药物往往具有毒副作用且生产成本高昂，开发具有降糖活性的天然化合物用于干预t2dm已成为营养学领域研究热点之一。食源性生物活性肽是天然活性化合物代表之一。过去十年，大量研究显示食源性生物活性肽对慢性代谢性疾病具有改善作用。
3、鸡蛋蛋白分布于蛋清和蛋黄中。由于鸡蛋清不含脂类，且含有卵清蛋白、卵转铁蛋白等多种功能性蛋白组分，蛋清蛋白已成为生物活性肽的主要来源之一。过去十年，对蛋清蛋白肽(egg white peptide，ewp)的研究集中在水解产物制备、多肽鉴定以及生物利用度。虽然围绕ewh干预慢性代谢性疾病的研究也已取得一定进展，但其对2型糖尿病动物模型的作用及机理尚不明确。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足，本专利技术提出了一种蛋清蛋白水解物在治疗或者预防2型糖尿病中的应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
>3、本专利技术的第一方面，涉及蛋清蛋白水解物在制备用于治疗或者预防2型糖尿病的药物中的应用。4、本专利技术的第二方面，涉及一种小鼠干预试验的实施方法，包括以下步骤：
5、分别构建健康的对照组、t2dm模型组、ewp干预组；
6、ewp干预组小鼠每日单次经口灌胃给予蛋清蛋白水解物，对照组和t2dm模型组小鼠每日经口灌胃给予生理盐水，干预期间，定期用血糖计测定试验小鼠随机及空腹血糖并监测小鼠体重变化；在干预结束前对各组小鼠进行腹腔糖耐量实验；
7、通过商业化酶联免疫吸附测定试剂盒测定试验小鼠血清中胰岛素、胰高血糖素、糖化血红蛋白和胰高血糖素样肽1的含量；
8、制作小鼠肝脏石蜡切片，染色后在显微镜下观察肝脏组织病理变化；
9、通过western blot检测肝脏糖异生通路关键分子表达水平；
10、提取肝脏组织总rna，通过qrt-pcr检测糖异生基因g6pc、pck表达水平；
11、基于非靶代谢组学分析ewp干预对t2dm小鼠肝脏代谢组的作用。
12、可选地，所述t2dm模型组的构建方法，包括以下步骤：t2dm小鼠模型建立：将6周龄雄性c57bl/6j小鼠用高脂饲料喂养7周，同时以同龄雄性基础饲料喂养小鼠作为对照；在第5周时，高脂饲料组小鼠每日经腹腔注射40mg/kg体重stz并持续5天；对照组小鼠每日经腹腔注射3ml/kg体重柠檬酸盐缓冲液并持续5天；stz注射结束一周后检测受试小鼠血糖，采用尾尖取血法，空腹血糖值大于11.1mmol/l即判定为t2dm建模成功。
13、可选地，ewp干预实验包括以下步骤：将小鼠进行以下分组：正常对照组(con)；t2dm模型组(t2dm)；低剂量ewp干预组(100mg/kg体重，ewp-l)；高剂量ewp干预组(1000mg/kg体重，ewp-h)。干预组小鼠每日单次经口灌胃给予ewp，对照组小鼠每日经口灌胃给予生理盐水，干预持续7周。干预期间，每周用血糖计测定试验小鼠随机及空腹血糖并监测小鼠体重变化。在干预最后一周对试验小鼠进行腹腔糖耐量实验，并通过活体动物身体组分分析仪对小鼠身体成分进行分析。处死小鼠后，收集保存试验小鼠血清、肝脏等样本用于后续机理研究。
14、可选地，ewp作用机理研究包括以下步骤：通过商业化酶联免疫吸附测定(elisa)试剂盒测定试验小鼠血清中胰岛素、胰高血糖素、糖化血红蛋白和胰高血糖素样肽1的含量。制作小鼠肝脏石蜡切片，经苏木精/伊红(h&e)染色、糖原染色(pas)和油红染色后在显微镜下观察肝脏组织病理变化；通过western blot检测肝脏糖异生通路关键分子表达水平；提取肝脏组织总rna，通过qrt-pcr检测糖异生基因g6pc、pck表达水平。基于非靶代谢组学分析ewp干预对t2dm小鼠肝脏代谢组的作用。
15、可选地，所述肝脏糖异生通路关键分子包括：pck、g6pc、tnf-α、il-1β和il-6。
16、可选地，所述ewp干预组包括相对的低剂量干预组以及高剂量干预组。
17、本专利技术的第三方面，涉及一种用于治疗或者预防2型糖尿病的药物，包括蛋清蛋白水解物。
18、本专利技术的第四方面，涉及肝脏中fahfa的促进剂在制备治疗2型糖尿病的药物中的应用。
19、本专利技术的第五方面，涉及蛋清蛋白水解物在制备治疗或者预防肝脏脂代谢异常疾病的药物中的应用。
20、有益效果：
21、(1)本申请的技术方案为2型糖尿病的治疗提供了一种新的有效途径。
22、(2)通过构建小鼠模型以及实验方法，获得ewp对t2dm小鼠的肝脏代谢影响资料数据，为ewp对于2型糖尿病的作用与机理提供一个新的研究方向。
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【技术保护点】
1.蛋清蛋白水解物在制备用于治疗或者预防2型糖尿病的药物中的应用。
2.一种小鼠干预试验的实施方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的小鼠干预试验的实施方法，其特征在于，所述T2DM模型组的构建方法，包括以下步骤：T2DM小鼠模型建立：将6周龄雄性C57BL/6J小鼠用高脂饲料喂养7周，同时以同龄雄性基础饲料喂养小鼠作为对照；在第5周时，高脂饲料组小鼠每日经腹腔注射40mg/kg体重STZ并持续5天；对照组小鼠每日经腹腔注射3mL/kg体重柠檬酸盐缓冲液并持续5天；STZ注射结束一周后检测受试小鼠血糖，采用尾尖取血法，空腹血糖值大于11.1mmol/L即判定为T2DM建模成功。
4.根据权利要求2所述的小鼠干预试验的实施方法，其特征在于，所述肝脏糖异生通路关键分子包括：PCK、G6PC、TNF-α、IL-1β和IL-6。
5.根据权利要求2所述的小鼠干预试验的实施方法，其特征在于，所述EWP干预组包括相对的低剂量干预组以及高剂量干预组。
6.一种用于治疗或者预防2型糖尿病的药物，其特征在于，包括蛋清蛋白水解物。p>
7.肝脏中羟基脂肪酸脂肪酸酯的促进剂在制备治疗2型糖尿病的药物中的应用。
8.蛋清蛋白水解物在制备治疗或者预防肝脏脂代谢异常疾病的药物中的应用。
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【技术特征摘要】
1.蛋清蛋白水解物在制备用于治疗或者预防2型糖尿病的药物中的应用。
2.一种小鼠干预试验的实施方法，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的小鼠干预试验的实施方法，其特征在于，所述t2dm模型组的构建方法，包括以下步骤：t2dm小鼠模型建立：将6周龄雄性c57bl/6j小鼠用高脂饲料喂养7周，同时以同龄雄性基础饲料喂养小鼠作为对照；在第5周时，高脂饲料组小鼠每日经腹腔注射40mg/kg体重stz并持续5天；对照组小鼠每日经腹腔注射3ml/kg体重柠檬酸盐缓冲液并持续5天；stz注射结束一周后检测受试小鼠血糖，采用尾尖取血法，空腹血糖值大于11.1mm...
【专利技术属性】
技术研发人员：廖望，曹歆祎，陈良，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：
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