本发明专利技术公开了一种早期胃癌血浆miRNAs生物标志物以及其应用，所述早期胃癌血浆miRNAs生物标志物包括miR‑199b‑5p、miR‑27b‑5p、miR‑5189‑5p、miR‑5010‑5p、miR‑204‑3p、miR‑452‑5p中的任意一个或多个组合，它们在早期胃癌和进展期胃癌中较正常对照人群显著高表达，可将其应用于制备早期胃癌筛查的检测试剂或筛查试剂盒，所述检测试剂或筛查试剂盒包括逆转录引物组、扩增引物组和内参试剂等，利用所述检测试剂或筛查试剂盒对血浆样本中的RNA进行特异性的转录、扩增等步骤后，检测上述早期胃癌血浆miRNAs生物标志物在血浆中的表达，从而快速、准确的完成早期胃癌的筛查诊断，解决现有早期胃癌筛查标记物敏感性和特异性不足，缺乏有效筛查手段的问题。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医学，具体涉及一种早期胃癌血浆mirnas生物标志物以及其应用。
技术介绍
1、胃癌是一种起源于胃上皮细胞的恶性肿瘤，严重威胁我国人民身体健康。胃癌的早期诊断对于患者的治疗和生存至关重要。开展大规模胃癌筛查可增加早期。相比于传统的内镜活检或手术后组织病理诊断金标准，液体活检往往具有方便性、快速性、微创性等优势并能够提供高效的早期诊断效能。临床中常用的液体活检胃癌筛查标记物主要有癌胚抗原（cea）、糖基抗原199（ca199）、糖基抗原125（ca125）、血清嗜铬粒蛋白a、血清dna甲基化、胃泌素17等，但是它们的敏感性和特异性不足，依靠这些标记物患者诊断时常处于疾病进展期。
2、mirnas是单链小的非编码rna，参与不同癌基因表达的转录后调节从而发挥癌基因或抑癌基因的作用。mirnas已被证实在血浆中可稳定存在，其表达失调与肿瘤的发生、发展相关，来自血浆的mirnas可以准确地响应肿瘤进展过程中肿瘤细胞的变化，使其成为潜在的生物标志物，具有诊断早期肿瘤性疾病的潜力。如血浆中4个mirnas（mir-1246、mir-206、mir-24、mir-373）的组合可作为乳腺癌早期诊断的潜在生物标志物，但是mirnas能否作为筛查早期胃癌的液体活检生物标志物，目前尚未见相关报道。
技术实现思路
1、针对上述不足，本专利技术公开了一种早期胃癌血浆mirnas生物标志物以及其应用，解决现有早期胃癌筛查标记物敏感性和特异性不足，缺乏有效筛查手段的问题。
2、本专利技术是采用如下技术方案实现的：
3、一种早期胃癌血浆mirnas生物标志物，其包括mir-199b-5p、mir-27b-5p、mir-5189-5p、mir-5010-5p、mir-204-3p、mir-452-5p中的任意一个或多个组合；
4、所述mir-199b-5p的序列如序列表中序列1所示为cccagtgtttagactatctgttc；
5、所述mir-27b-5p的序列如序列表中序列2所示为agagcttagctgattggtgaac；
6、所述mir-5189-5p的序列如序列表中序列3所示为tctgggcacaggcggatggacagg；
7、所述mir-5010-5p的序列如序列表中序列4所示为agggggatggcagagcaaaatt；
8、所述mir-204-3p的序列如序列表中序列5所示为gctgggaaggcaaagggacgt；
9、所述mir-452-5p的序列如序列表中序列6所示为aactgtttgcagaggaaactga。
10、上述早期胃癌血浆mirnas生物标志物的应用，其是所述早期胃癌血浆mirnas生物标志物在制备用于早期胃癌筛查的检测试剂中的应用。
11、进一步的，所述的检测试剂包括扩增引物组，所述扩增引物组包括以下引物：
12、扩增引物452，其的序列如序列表中序列7所示为aactgtttgcagaggaaactg；
13、扩增引物199，其的序列如序列表中序列8所示为cccagtgtttagactatctgtt；
14、扩增引物27，其的序列如序列表中序列9所示为agagcttagctgattggtgaac；
15、扩增引物5010，其的序列如序列表中序列10所示为agggggatggcagagcaa；
16、扩增引物5189，其的序列如序列表中序列11所示为cacaggcggatggacagg；
17、扩增引物204，其的序列如序列表中序列12所示为ctgggaaggcaaagggac。
18、进一步的，所述的扩增引物组用于对逆转录后得到的cdna进行pcr扩增，所述pcr扩增的扩增体系为15μl，其包括2×universal sybr qpcr mix 7.5μl、上游引物0.6μl、下游引物0.6μl、cdna的模板1μl、无酶水5μl、rox 0.3μl；所述pcr扩增的扩增程序为95℃预变性30s，95℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共进行40个循环。所使用的上游引物即为所述的扩增引物组中的引物，使用的下游引物可以是逆转录试剂盒中使用的下游引物。
19、一种用于早期胃癌筛查的试剂盒，其包括内参试剂和上述的检测试剂；所述内参试剂用于内参照基因u6的检测，其包括以下引物：
20、引物u6-f，其的序列如序列表中序列13所示为ctcgcttcggcagcaca；
21、引物u6-r，其的序列如序列表中序列14所示为aacgcttcacgaatttgcgt。
22、本技术方案与现有技术相比较具有以下有益效果：
23、本专利技术以血浆中的mirna作为早期胃癌筛查诊断的生物标志物，其包括mir-199b-5p、mir-27b-5p、mir-5189-5p、mir-5010-5p、mir-204-3p、mir-452-5p中的任意一个或多个组合，所述生物标志物在早期胃癌和进展期胃癌中较正常对照人群显著高表达，并且进展期胃癌较早期胃癌组显著高表达，在样本测试中，绘制roc曲线进行诊断效能评价，所述mir-452-5p的auc为0.9，mir-27b-5p的auc为0.893；mir-199b-5p的auc为0.904，它们在早癌组血浆中显示出显著的高诊断性能。根据所述生物标志物制备用于早期胃癌筛查的检测试剂或筛查试剂盒，其具有灵敏度高、特异性好的优点，可以快速、准确的完成早期胃癌的筛查诊断。
本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种早期胃癌血浆miRNAs生物标志物，其特征在于：包括miR-199b-5p、miR-27b-5p、miR-5189-5p、miR-5010-5p、miR-204-3p、miR-452-5p中的任意一个或多个组合；
2.如权利要求1所述的早期胃癌血浆miRNAs生物标志物的应用，其特征在于，所述应用是所述早期胃癌血浆miRNAs生物标志物在制备用于早期胃癌筛查的检测试剂中的应用。
3.根据权利要求3中所述的应用，其特征在于：所述的检测试剂包括扩增引物组，所述扩增引物组包括以下引物：
4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的扩增引物组用于对逆转录后得到的cDNA进行PCR扩增，所述PCR扩增的扩增体系为15μL，其包括2×Universal SYBR qPCRMix 7.5μL、上游引物0.6μL、下游引物0.6μL、cDNA的模板1μL、无酶水5μL、ROX 0.3μL；所述PCR扩增的扩增程序为95℃预变性30s，95℃变性10s，60℃退火30s，72℃延伸30s，共进行40个循环。
5.一种用于早期胃癌筛查的试剂盒，其特征在于：包括内参试剂和如权利要求4中所述的检测试剂；所述内参试剂用于内参照基因U6的检测，其包括以下引物：
...
【技术特征摘要】
1.一种早期胃癌血浆mirnas生物标志物，其特征在于：包括mir-199b-5p、mir-27b-5p、mir-5189-5p、mir-5010-5p、mir-204-3p、mir-452-5p中的任意一个或多个组合；
2.如权利要求1所述的早期胃癌血浆mirnas生物标志物的应用，其特征在于，所述应用是所述早期胃癌血浆mirnas生物标志物在制备用于早期胃癌筛查的检测试剂中的应用。
3.根据权利要求3中所述的应用，其特征在于：所述的检测试剂包括扩增引物组，所述扩增引物组包括以下引物：
4. 根据权利要求3所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：葛莲英，刘爱群，马福超，冯洁，蒋旗，
申请(专利权)人：广西医科大学附属肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。