【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及dna纳米载药，特别是涉及一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物载体及应用。
技术介绍
1、癌症疗法最重要的目标是在不影响正常细胞功能的情况下诱导恶性细胞死亡。癌症疗法主要通过诱导细胞凋亡来导致细胞死亡。然而，癌细胞有逃避细胞凋亡的能力，从而增加了它们对现有疗法的抵抗力。越来越多的研究发现，与容易产生耐药性的细胞凋亡相比，包括坏死、铁死亡和焦亡在内的其他程序性细胞死亡(pcd)具有更高的治疗潜力和免疫激活效应。最近，作为一种坏死性和溶解性的程序性细胞死亡，焦亡因其诱发炎症反应的能力而备受关注。细胞焦亡的特点是质膜穿孔、细胞肿胀、渗透和释放免疫原性细胞内容物。细胞焦亡是通向肿瘤免疫的新桥梁。细胞焦亡可以重塑肿瘤免疫微环境，将“冷”肿瘤激发为免疫原性的“热”肿瘤，从而提高恶性肿瘤的治疗效果。因此，调节癌细胞中焦亡的发生对癌症治疗，尤其是对凋亡有抵抗力的癌症治疗非常重要。
2、化疗药物诱导的活性氧(ros)可诱发细胞焦亡，但其耐药性和副作用严重限制了其生物医学应用。介孔二氧化硅纳米粒子、金属氧化物纳米粒子和金属有机骨架纳米粒子等多种纳米粒子可在不同细胞中以不可控的方式诱导焦亡。因此，能够实现可控焦亡的纳米材料在癌症治疗中受到越来越多的关注，比如共聚物纳米胶束、金属纳米颗粒等。然而，上述纳米材料缺乏靶向性，且不可生物降解，其潜在的长期毒性可能会限制临床转化和应用。因此，需要进一步开发安全且可生物降解的焦亡可控的纳米材料，以应用于生物医学领域。
技术实现思路
1、本专利
2、为了实现上述目的，本专利技术提供了一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物载体，所述dna纳米药物载体由y-dna和l-dna组装形成，所述y-dna由三条带有粘性末端的核酸链通过退火杂交形成，即所述y-dna由y1、y2和y3合成；所述l-dna由两条核酸链和一条带有i-motif的核酸链通过退火杂交形成，即所述l-dna由l1、l2和l3合成；所述的y1，y2和y3的黏性末端与l3的黏性末端互补；所述的l3的i-motif区间的c碱基个数为24。
3、进一步，所述y1的dna序列如seq id no.1所示，所述y2的dna序列如seq id no.2所示，所述y3的dna序列如seq id no.3所示；
4、所述l1的dna序列如seq id no.4所示，所述l2的dna序列如seq id no.5所示，所述l3的dna序列如seq id no.6所示。
5、本专利技术还提供了一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物，所述y1，y2和y3的3’端标记光敏剂，与l-dna组装后形成抗肿瘤纳米药物。
6、进一步，所述光敏剂为ce6，所述y1的dna序列如seq id no.8所示，所述y2的dna序列如seq id no.9所示，所述y3的dna序列如seq id no.10所示。
7、本专利技术需要说明的是光敏剂还可以选择为其他类型的光敏剂，比如孟加拉玫瑰红(rb)。
8、进一步，所述l3的中间标记淬灭基团。
9、进一步，淬灭基团为bhq2，所述l3的dna序列为seq id no.11所示。
10、本专利技术需要说明的是淬灭基团还可以选择为其他相应能淬灭光敏剂荧光的淬灭基团，比如光敏剂孟加拉玫瑰红(rb)和bhq1的组合。
11、本专利技术还提供了一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物载体的制备方法，包括以下步骤：
12、s1、将y1、y2和y3等浓度共混得到混合溶液a，将混合溶液a置于95℃加热5min，然后冷却至室温，得到y-dna；
13、s2、将l1、l2和l3以浓度比为1:1:2共混得到混合溶液b，将混合溶液b置于95℃加热5min，然后冷却至室温，得到l-dna；
14、s3、将上述的y-dna和l-dna以浓度比为1：2共混合得到混合溶液c，将混合溶液c置于37℃孵育24h，得到dna纳米球；
15、s4、将得到的dna纳米球与核酸适配体aptas1411以1:5的比例加入，置于37℃孵育2h，即得到dna纳米药物载体。
16、进一步，所述apt的dna序列如seq id no.7所示。
17、进一步，所述步骤s1具体为将y1、y2和y3等浓度共混于10mm磷酸缓冲液和50mm的氯化镁溶液中得到混合溶液a。
18、本专利技术还提供了一种上述可诱导细胞焦亡的dna纳米药物载体在制备抗肿瘤药物的应用。
19、本专利技术方案涉及的序列如下：
20、seq id no.1：
21、5'-acgctgtcctaaccatgaccgccgaactgcaagtggt-3'
22、seq id no.2：
23、5'-ttcggcggtcatgtactagatcaggc ctgcaagtggt-3'
24、seq id no.3：
25、5'-gcctgatctagtagttaggacagcgt ctgcaagtggt-3'
26、seq id no.4：
27、5'-gattcaagttatcatttaat cctactggcatttgctgaacgcatt-3'
28、seq id no.5：
29、5'-gattcaagttatcatttaataatgcgttcagcaaatgccagtagg-3'
30、seq id no.6：
31、5'-attaaatgataacttgaatcttttttcccccctcccccctaccacttgcagctcccccctcccccc-3'
32、seq id no.7：
33、5'-accacttgcagttttttggtggtggtggttgtggtggtggtgg-3'
34、seq id no.8：
35、5'-acgctgtcctaaccatgaccgccgaactgcaagtggt-ce6-3'
36、seq id no.9：
37、5'-ttcggcggtcatgtactagatcaggcctgcaagtggt-ce6-3'
38、seq id no.10：
39、5'-gcctgatctagtagttaggacagcgtctgcaagtggt-ce6-3'
40、seq id no.11：
41、5'-attaaatgataacttgaatcttttttcccccctcccccct(bh本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物载体，其特征在于，所述DNA纳米药物载体由Y-DNA和L-DNA组装形成，所述Y-DNA由三条带有粘性末端的核酸链通过退火杂交形成，即所述Y-DNA由Y1、Y2和Y3合成；所述L-DNA由两条核酸链和一条带有i-motif的核酸链通过退火杂交形成，即所述L-DNA由L1、L2和L3合成；所述Y1，Y2和Y3的黏性末端与L3的黏性末端互补；所述L3的i-motif区间的C碱基个数为24。
2.根据权利要求1所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物载体，其特征在于，所述Y1的DNA序列如SEQ ID NO.1所示，所述Y2的DNA序列如SEQ ID NO.2所示，所述Y3的DNA序列如SEQ ID NO.3所示；所述L1的DNA序列如SEQ ID NO.4所示，所述L2的DNA序列如SEQ IDNO.5所示，所述L3的DNA序列如SEQ ID NO.6所示。
3.根据权利要求1所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物，其特征在于，所述Y1，Y2和Y3的3’端标记光敏剂，与L-DNA组装后形成抗肿瘤纳米药物。
4
5.根据权利要求1、3或4所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物，其特征在于，所述L3的中间标记淬灭基团。
6.根据权利要求5所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物，其特征在于，所述淬灭基团为BHQ2，所述L3的DNA序列为SEQ ID NO.11。
7.根据权利要求1或2所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物载体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物载体的制备方法，其特征在于，所述apt的DNA序列如SEQ ID NO.7所示。
9.根据权利要求8所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物载体的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体为将Y1、Y2和Y3等浓度共混于10mM磷酸缓冲液和50mM的氯化镁溶液中得到混合溶液A。
10.根据权利要求1所述的一种可诱导细胞焦亡的DNA纳米药物载体在制备抗肿瘤药物的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物载体，其特征在于，所述dna纳米药物载体由y-dna和l-dna组装形成，所述y-dna由三条带有粘性末端的核酸链通过退火杂交形成，即所述y-dna由y1、y2和y3合成；所述l-dna由两条核酸链和一条带有i-motif的核酸链通过退火杂交形成，即所述l-dna由l1、l2和l3合成；所述y1，y2和y3的黏性末端与l3的黏性末端互补；所述l3的i-motif区间的c碱基个数为24。
2.根据权利要求1所述的一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物载体，其特征在于，所述y1的dna序列如seq id no.1所示，所述y2的dna序列如seq id no.2所示，所述y3的dna序列如seq id no.3所示；所述l1的dna序列如seq id no.4所示，所述l2的dna序列如seq idno.5所示，所述l3的dna序列如seq id no.6所示。
3.根据权利要求1所述的一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药物，其特征在于，所述y1，y2和y3的3’端标记光敏剂，与l-dna组装后形成抗肿瘤纳米药物。
4.根据权利要求3所述的一种可诱导细胞焦亡的dna纳米药...
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