抗体与磁珠偶联物及其偶联方法技术

本发明专利技术公开抗体与磁珠偶联物及其偶联方法。本发明专利技术的方法包括：在第一缓冲液中使羧基磁珠先后与1‑(3‑二甲氨基丙基)‑3‑乙基碳二亚胺盐酸盐和N‑羟基琥珀酰亚胺反应，分离磁珠后在第二缓冲液中进一步与含巯基的酰肼反应得到羧基活化的修饰磁珠；在第二缓冲液中使糖类抗体经温和氧化处理得到修饰抗体；然后使修饰磁珠和修饰抗体反应形成共价键。本发明专利技术解决现有通过还原剂还原抗体内的二硫键引入巯基而导致抗体活性受到影响的问题，提高了偶联效率。同时，本发明专利技术的方法具有更低的背景发光值，且检测抗体，特别是低浓度抗体时发光值更高，灵敏度显著提高，具有明显优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体与磁珠偶联，具体地涉及通过含巯基的特定试剂来将抗体和磁珠偶联的方法以及由此得到的偶联物。

技术介绍

1、在免疫检测中，抗体可以通过化学或物理吸附手段固定在固相表面，但通常间接偶联技术在抗体的偶联中应用更广泛。例如，抗体中的氨基，抗体蛋白质分子中每个肽链都具有末端氨基，氨基可以与多种官能团具有反应性，包括活化羧基、醛等。氨基在抗体中大量存在，使其成为抗体偶联反应中最常见的基团。

2、巯基是抗体蛋白质上另一个重要的反应基团，具有很高的活性。抗体中的巯基大部分来自于半胱氨酸的侧链，多数情况下，抗体上的巯基会交联形成分子内二硫键，而二硫键无法直接用于衍生。因此，在利用巯基进行偶联反应时一般使用2-亚氨基硫烷等与伯胺基反应引入巯基或者利用巯基乙胺(2-mea)或二硫苏糖醇(dtt)等还原剂将胱氨酸的二硫键还原为含有巯基的半胱氨酸残基。

3、目前常用的巯基引入方法有traut试剂、巯基乙胺(2-mea)或dtt还原等方法。traut试剂(2-亚氨基硫烷或2-it)是一种用于硫醇化(巯基加成)的环状硫代亚氨酸酯化合物，但是在抗体本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，所述第一缓冲液为2-(N-吗啉代)乙磺酸缓冲液，所述第二缓冲液为磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，所述第一缓冲液的pH为4-6，所述第二缓冲液的pH为6.5-8。

4.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，所述含巯基的酰肼的为3-巯基丙酰肼。

5.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，步骤(2)中的温和氧化处理包括使用NaIO4在PBS...

【技术特征摘要】

1.一种用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，所述第一缓冲液为2-(n-吗啉代)乙磺酸缓冲液，所述第二缓冲液为磷酸盐缓冲液。

3.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，所述第一缓冲液的ph为4-6，所述第二缓冲液的ph为6.5-8。

4.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，所述含巯基的酰肼的为3-巯基丙酰肼。

5.根据权利要求1所述的用于抗体和磁珠偶联的方法，其特征在于，步骤(2)中的温和氧化处理包括使用naio4在pbs缓冲液中进行氧化反应。

【专利技术属性】
技术研发人员：赵攀峰，杜金凤，
申请(专利权)人：上海公安学院，
类型：发明
国别省市：