【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物体内发光检测，具体涉及生物发光探针及其制备方法和用途、用于检测羧酸酯酶2的生物发光检测试剂盒和检测方法。
技术介绍
1、生物发光是一种自然界普遍存在的，依赖于生物正常生命活动的化学发光。其本质是酶和底物之间的相互作用，经过一系列生物反应产生化学能，并以光能的形式释放出来。生物发光成像是利用生物体内酶催化的化学反应产生光子的原理进行的。最常见的生物发光体系是萤火虫萤光素酶（luciferase）-萤光素（luciferin）系统，其实质是萤火虫萤光素酶在能量（atp）及氧存在的条件下催化底物萤光素，发生电子跃迁，分子由激发态回到稳态时产生光子，并释放氧化性萤光素（oxyluciferin）。生物发光成像技术凭借其高灵敏性、高生物相容性以及可视化等特点已经成为很重要的检测的手段，被广泛应用于各个领域。
2、羧酸酯酶2（ces2）在许多癌细胞中高表达，ces2在介导许多原药如吉西他滨、伊立替康（cpt11）和卡培他滨（cape）的激活过程中起作用。此外，ces2被认为是肠道第一道代谢的重要决定因素，特别是对于口服抗癌原药。鉴于ces2在各种抗癌原药代谢中的关键作用，开发合适的技术在复杂的生理条件下准确、灵敏地检测ces2是相当必要的。目前已经建立了几种评估ces2活性的有效方法，包括荧光探针和近红外荧光探针[doi: 10.1021/acs.analchem.9b04189; doi: 10.1021/acsami.5b09573; doi:10.1016/j.bios.2016.04.075]。然而，荧
3、在生物发光检测中，生物发光探针是不可或缺的工具。而如何设计探针分子的结构，使其针对特定的酶的生理功能和底物特异性，同时具有高选择性和超灵敏度，这是生物发光探针设计中的难点。
技术实现思路
1、针对现有技术的问题，本专利技术提供一种生物发光探针及其制备方法和用途、用于检测羧酸酯酶2的生物发光检测试剂盒和检测方法。
2、式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型，所述化合物的结构式如下：
3、
4、式i。
5、本专利技术还提供上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型的制备方法，包括如下步骤：
6、
7、步骤1，将化合物1和化合物2进行反应，得到化合物3；
8、步骤2，将化合物3和d-半胱氨酸盐酸盐反应，即得。
9、优选的，步骤1中，溶剂选自二氯甲烷；
10、和/或，反应在碱的作用下进行，碱选自三乙胺；
11、和/或，反应温度为25 ℃～40 ℃，反应时间为4～6 h。
12、优选的，步骤2中，溶剂选自二氯甲烷、甲醇和水的混合溶剂；
13、和/或，反应在碱的作用下进行，碱选自碳酸钾；
14、和/或，反应温度为20 ℃～30 ℃，反应时间为1～2 h。
15、本专利技术还提供上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型在非诊断目的检测羧酸酯酶2的过程中，用于作为生物发光探针的用途。
16、本专利技术还提供上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型在制备用于检测羧酸酯酶2的生物发光检测试剂盒的用途。
17、本专利技术还提供一种用于检测羧酸酯酶2的生物发光检测试剂盒，它包括上述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型。
18、本专利技术还提供一种非诊断目的的羧酸酯酶2的生物发光检测方法，包括如下步骤：
19、步骤a，将权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型作为生物发光探针，与待检测样品混合孵育，或注射至待检生物体内；
20、步骤b，对待检测样品或待检生物进行生物发光检测。
21、优选的，步骤b中，在混合孵育或注射后1-60 min，进行生物发光检测。
22、本专利技术针对羧酸酯酶2设计了一种生物发光检测生物发光探针。羧酸酯酶2可与该生物发光探针中的酯基作用，从而使其酯基断裂，释放出羟基荧光素，具体反应如下：
23、
24、羟基荧光素在atp、萤光素酶、mg2+等作用下产生强生物发光。并且生物发光强度与羧酸酯酶2浓度在一定范围内呈优良的线性关系，可作为羧酸酯酶2定性、定量检测的依据。因此，本专利技术具有很好的应用前景。
25、本专利技术具有如下有益的技术效果：
26、1、通过对分子结构的设计，本专利技术的生物发光探针兼具有高灵敏度和强选择性，能够更好地进行羧酸酯酶2的检测。
27、2、本专利技术的生物发光探针的制备方法简单、收率高、成本低。
28、3、在tris-hcl缓冲液中，本专利技术的生物发光探针的生物发光强度与羧酸酯酶2浓度呈现良好的线性关系，说明探针适合定量检测羧酸酯酶2，探针也实现了活体水平（fvb-luc+转基因小鼠）内源性羧酸酯酶2的高灵敏检测，且响应较快，生物发光信号较稳定等优点。
29、4、本专利技术的生物发光探针具有良好的生物相容性。
30、显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
31、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
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1.式I所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型，所述化合物的结构式如下：
2.权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤1中，溶剂选自二氯甲烷；
4.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤2中，溶剂选自二氯甲烷、甲醇和水的混合溶剂；
5.权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型在非诊断目的检测羧酸酯酶2的过程中，用于作为生物发光探针的用途。
6.权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型在制备用于检测羧酸酯酶2的生物发光检测试剂盒的用途。
7.一种用于检测羧酸酯酶2的生物发光检测试剂盒，其特征在于：它包括权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型。
8.一种非诊断目的的羧酸酯酶2的生物发光检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
9.按照权利要求8所述非诊断目的的羧酸
...【技术特征摘要】
1.式i所示的化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型，所述化合物的结构式如下：
2.权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
3.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤1中，溶剂选自二氯甲烷；
4.按照权利要求2所述的制备方法，其特征在于：步骤2中，溶剂选自二氯甲烷、甲醇和水的混合溶剂；
5.权利要求1所述化合物、或其药学上可接受的盐、或其立体异构体、或其晶型在非诊断目的检测羧酸酯酶2的过程中，用于作为生物...
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