【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及有机合成，尤其是涉及一种用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤严重威胁人们的健康和生命。苏氨酸酪氨酸激酶(ttk)是纺锤体组装检查点(sac)的核心成分，保证染色体在子细胞中的适当分布，平衡生长和分裂，是一种保证有丝分裂保真度和基因组稳定性的蛋白激酶。sac是一种关键的监测机制，通过延迟有丝分裂的进程，直到所有的染色体都正确地附着在纺锤体微管上，以确保染色体的准确分离，防止染色体错误分裂。ttk过表达时，纺锤体组装检查点的功能受到影响并失活，导致有丝分裂点过早退出，最终导致染色体不稳定，形成非整倍体，甚至细胞死亡。sac保证了细胞的健康生长和准确的细胞分裂，考虑到ttk在细胞分裂中的关键作用，它可能成为一种新的生物标志物。
2、近年来的研究发现ttk在一些恶性肿瘤如胰腺癌、肺癌和肝癌中的表达明显增加，可以促进肿瘤细胞的增殖，与肿瘤细胞的侵袭转移有关。在乳腺癌中，ttk的高水平表达被发现可以导致非整倍体，并使这些细胞能够耐受非整倍体。在结肠癌中，ttk过表达可导致非整倍性增加，并因sac功能减弱而导致癌变。但是目前用于检测ttk浓度的方法仅有电化学发光免疫分析法和生物检测器法，存在操作复杂，成本高等问题，而荧光探针具有操作简单，成本低，灵敏度高等特点，已广泛应用于生物标志物的检测，因此本课题设计合成了一种可以快速检测ttk的荧光探针。该探针对ttk具有选择性和灵敏度，具有区分癌细胞与正常细胞的潜力，对肿瘤的早期筛选提供了可能的工具。该方法虽可用于原位实时监测苏氨酸酪
3、因此，设计合成一种可用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针具有十分重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出一种用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针，对苏氨酸酪氨酸激酶具有选择性和响应性，并具有检测细胞微环境变化以及ttk响应的潜力。
2、本专利技术还提供了上述荧光探针的制备方法。
3、本专利技术还提供了上述荧光探针的应用。
4、本专利技术的第一方面提供了用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针，所述荧光探针的结构式如式ⅰ所示：
5、
6、本专利技术实施例的用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针，至少具有如下有益效果：
7、本专利技术的荧光探针用于检测ttk时的荧光强度最高提高了约8倍，且对ttk具有高选择性和高灵敏度，荧光强度随ttk浓度增大而增大，这是因为本专利技术的荧光探针是基于ict的响应性荧光探针，其荧光基团以哌嗪基(电子供体)和(1-乙基吡啶基)作为电子受体直接共轭，形成d-π-a型分子，连接组成的推-拉电子体系，可用于生物体内苏氨酸酪氨酸激酶浓度的检测。
8、本专利技术的荧光探针具有水溶性和环境响应性，且荧光强度是ph的函数，在ph值4.5～7.5范围内相对变化显著，可用于检测细胞微环境变化。
9、本专利技术的第二方面提供了上述荧光探针的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
10、将化合物8与化合物14、缩合剂加入到有机溶剂1中反应，得到式ⅰ所示的化合物；
11、其中，所述化合物8和化合物14的结构式如下：
12、
13、根据本专利技术提供的制备方法，至少具备以下有益效果：
14、本专利技术所述的制备方法工艺较为简便，容易分离提纯，产率较高，具有良好的社会价值和应用前景。
15、根据本专利技术的一些实施方式，所述化合物8和所述化合物14的摩尔比为1：(1.0～1.2)。
16、化合物14的主要作用是提供靶向作用，与ttk结合。
17、根据本专利技术的一些实施方式，所述有机溶剂1选自n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷中的至少一种。
18、根据本专利技术的一些实施方式，所述反应指的是在室温条件下反应2～6h。
19、根据本专利技术的一些实施方式，所述缩合剂包括碳二亚胺类缩合剂、鎓盐类缩合剂和有机磷缩合剂中的至少一种。
20、根据本专利技术的一些实施方式，所述碳二亚胺类缩合剂包括dic、dcc和edci中的至少一种。
21、根据本专利技术的一些实施方式，所述鎓盐类缩合剂包括hatu、hbtu、hctu、tbtu、hapyu、bop、pybop中的至少一种。
22、根据本专利技术的一些实施方式，所述有机磷缩合剂包括dpp-cl、dppa、mpta、bop-cl、t3p和t4p中的至少一种。
23、优选地，所述缩合剂为1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺和1-羟基苯并三唑(edci)。
24、根据本专利技术的一些实施方式，所述化合物8的制备方法包括以下步骤：
25、将化合物7与碱在有机溶剂2中反应，得到化合物8；
26、其中，所述化合物7的结构式如下：
27、
28、根据本专利技术的一些实施方式，所述碱包括氢氧化钠。
29、根据本专利技术的一些实施方式，所述化合物7和氢氧化钠的摩尔比为1：(5～6)。
30、根据本专利技术的一些实施方式，所述氢氧化钠在溶液中的摩尔浓度为0.4m。
31、根据本专利技术的一些实施方式，所述有机溶剂2选自甲醇、乙醇和水中的至少一种。
32、根据本专利技术的一些实施方式，所述反应指的是在室温条件下搅拌反应4～6h。
33、根据本专利技术的一些实施方式，所述反应完成后还包括过滤、洗涤和减压浓缩处理。
34、根据本专利技术的一些实施方式，所述化合物7的制备方法包括以下步骤：
35、将化合物5、化合物6和催化剂在有机溶剂3中回流反应，得到化合物7；
36、其中，所述化合物5和化合物6的结构式如下：
37、
38、根据本专利技术的一些实施方式，所述化合物5、所述化合物6和哌啶的摩尔比为1：(1.2～1.5)：0.5。
39、根据本专利技术的一些实施方式，所述有机溶剂3选自乙腈和乙醇中的至少一种。
40、根据本专利技术的一些实施方式，所述催化剂包括哌啶基团、三乙胺、吡啶基团、dipea中的至少一种。其中所述催化剂均为弱碱性。
41、优选地，所述催化剂为哌啶基团。
42、根据本专利技术的一些实施方式，所述回流反应再惰性氛围下进行。
43、根据本专利技术的一些实施方式，所述惰性气氛包括氮气、氩气和氖气中的至少一种。
44、根据本专利技术的一些实施方式，所述化合物5的制备方法包括以下步骤：
45、将对氟苯甲醛、2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯和无机碱加入到有机溶剂4中进行回流反应，得到化合物5。
46、根据本专利技术的一些实施方式，所述对氟苯甲醛、2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯和无机碱的摩尔比1：(0.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式如式Ⅰ所示：
2.一种如权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物8和所述化合物14的摩尔比为1：(1.0～1.2)；优选地，所述有机溶剂1选自N,N-二甲基甲酰胺和二氯甲烷中的至少一种；优选地，所述反应指的是在室温条件下反应2～6h；优选地，所述缩合剂包括碳二亚胺类缩合剂、鎓盐类缩合剂和有机磷缩合剂中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物8的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述化合物7的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述化合物5、所述化合物6和哌啶的摩尔比为1：(1.2～1.5)：0.5；优选地，所述有机溶剂3选自乙腈和乙醇中的至少一种；优选地，所述催化剂包括哌啶基团、三乙胺、吡啶基团、DIPEA中的至少一种。
7.根据权利要求6所述的
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述4-甲基吡啶与所述卤代乙烷的摩尔比为1：(1.5～3)；优选地，所述对氟苯甲醛、2-(哌嗪-1-基)乙酸乙酯和无机碱的摩尔比1：(0.8-1)：(1.2～2.5)；优选地，所述有机溶剂4选自乙腈和甲苯中的至少一种；优选地，所述有机溶剂5选自乙腈、二氯甲烷、四氢呋喃和DMF中的至少一种。
9.一种苏氨酸酪氨酸激酶检测试剂盒，其特征在于，包括苏氨酸酪氨酸激酶检测的荧光探针；
10.一种如权利要求1所述用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针在非疾病诊断或治疗目的的检测生物体内苏氨酸酪氨酸激酶浓度或评估生物细胞内微环境的中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于检测苏氨酸酪氨酸激酶的荧光探针，其特征在于，所述荧光探针的结构式如式ⅰ所示：
2.一种如权利要求1所述的荧光探针的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物8和所述化合物14的摩尔比为1：(1.0～1.2)；优选地，所述有机溶剂1选自n,n-二甲基甲酰胺和二氯甲烷中的至少一种；优选地，所述反应指的是在室温条件下反应2～6h；优选地，所述缩合剂包括碳二亚胺类缩合剂、鎓盐类缩合剂和有机磷缩合剂中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述化合物8的制备方法包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述化合物7的制备方法包括以下步骤：
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述化合物5、所述化合物6和哌啶的摩尔比为1：(1.2～1.5)：0.5；...
【专利技术属性】
技术研发人员：李红光，刘正婷，纪昕沛，黎惠珊，向明丽，曾欣怡，甄旖萸，
申请(专利权)人：五邑大学，
类型：发明
国别省市：
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