【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及trabd蛋白、其双特异性抗体，及分离扩增和应用，属于生物工程和生物治疗领域。
技术介绍
1、过继性细胞疗法(act)是治疗癌症的一个充满前景的选择，其中具有抗原特异性的cd8+t细胞的过继性细胞疗法是指大量来自患者自身的cd8+t细胞在体外诱导分化、改造、扩增，获得对肿瘤细胞的特异性后，回输给患者，提高cd8+t细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。起初，用于act的细胞来自于患者自身肿瘤浸润淋巴细胞，但其受限于肿瘤浸润淋巴细胞数目不多以及无法从根本上加强或改善对肿瘤的杀伤能力。
2、免疫检查点是能够调节免疫激活程度的一系列分子，它的存在为免疫系统在肿瘤免疫应答过程中防止过度自身免疫导致自身组织细胞受损，维持免疫耐受提供了支持。而一些聪明的肿瘤细胞却可以向表达免疫检查点的免疫细胞传递负向信号，为其逃逸免疫应答的手段。免疫检查点封锁疗法即针对这一现象，利用免疫检查点抑制剂，解除抑制，恢复cd8+t细胞等免疫细胞对肿瘤细胞的细胞毒性。
3、对于免疫检查点的研究，近年来卓越的成果层出不穷，免疫检查点pd-1、ctla-4、tigit、lag-3、tim3在免疫系统中发挥了突出的作用，针对这些免疫检查点的单克隆抗体抑制剂的研究近十多年来也有了不少突破性的进展。但越来越多的研究表明，使用单独的免疫检查点阻断疗法只对小部分患者有效，而对大多数患者不能达到客观的效果，甚至产生不良反应，这与患者疾病类型及个体差异相关。所以，目前提倡开展将不同免疫检查点阻断剂联合用药，或者开展其他与免疫检查点阻断剂具有协同作用的药物及
4、2019美国癌症研究协会(aacr)年会中报道，研究者对胰腺癌患者使用apx005m(抗cd40 mab)，gemcitabine(dna合成抑制剂)及化疗药物nab-paclitaxel(np)联合nivolumab(抗pd-1mab)进行治疗，ib期临床实验显示出积极的结果。近期研究显示，联合使用atezolizumab(抗pd-l1 mab)和bevacizumab(anti-vegf)治疗无法切除的肝癌患者比单独用药具有更好的治疗反应。且这一联合用药方案，已经获得了fda的批准。尽管如此，部分患者仍存在不同程度的不良反应，为了确定针对不同疾病的最佳的联合用药方案，还需要更多的临床设计和数据来支持。
5、trabd2a及其旁系同源物trabd2b编码一种主要分布在细胞膜的i型跨膜糖蛋白，该结构一次跨膜，大部分结构露于细胞膜外侧，无论是位于膜内或者膜外，trabd蛋白都可以发挥作用。此外，trabd蛋白含有trab结构域，是一种金属蛋白酶，其活性依赖于二价金属离子作为辅助因子，因此trabd蛋白的功能可以被二价金属离子络合剂(edta或1,10-菲咯啉)抑制。早期一项研究显示，co2+和mn2+对于trabd蛋白酶的活性具有促进作用，而ni2+和cu2+对trabd2a、trabd2b蛋白酶活性的作用相反。trabd蛋白酶缺乏锌结合基序(hexxh)，故trabd蛋白酶也不是zn2+依赖性蛋白酶。但有不同的观点指出，trabd2a、trabd2b蛋白的活性受到co2+和ni2+的抑制，且与mg2+、ca2+和fe3+无关，这可能与蛋白酶的不同功能有关。
6、长期以来，trabd蛋白酶被认为具有蛋白水解酶的活性，充当wnt抑制剂在分泌wnt供体细胞以及wnt受体细胞中均可以切割wnt3a、wnt5a、wnt8达到灭活的作用。值得一提的是，2019年的一项研究首次报道，t细胞膜表面有trabd2a的表达，而且trabd2a、trabd2b是人类1型免疫缺陷病毒(hiv-1)形成过程中的一个重要限制元素。hiv-1病毒侵入宿主进行复制，后期在细胞膜上组装形成病毒颗粒，trabd2a、trabd2b蛋白酶降解病毒结构蛋白gag的前体蛋白，抑制了cd4+t细胞中hiv-1病毒的产生和释放。该团队也发现原代单核细胞衍生的树突状细胞(mddcs)膜上有trabd蛋白酶的表达，同时验证了trabd蛋白酶也抑制了mddcs中hiv-1的产生和释放。
7、cd8+t细胞作为适应性免疫的重要组成部分，在清除各种病原微生物和肿瘤细胞中发挥关键的作用。活化的杀伤性cd8+t细胞又称为细胞毒性t细胞(cytotoxic t cell,ctl)，主要通过三种途径发挥效应功能:①产生细胞因子tnf-α和ifn-γ；②表面fasl与靶细胞表面的fas结合,启动靶细胞内凋亡信号；③释放穿孔素、颗粒酶等细胞毒性颗粒裂解靶细胞。其中，cd8+t细胞毒性颗粒在分泌之前，需要经过n端修饰后，沿着微管向免疫突触移动，在cd8+t细胞质膜与靶细胞质膜作用的界面，rab27a的作用下与内体“胞外囊泡”进行对接，形成“毒性颗粒-胞外囊泡”融合囊泡，才获得分泌的能力，分泌至突触间隙发挥作用。ctl除了经典三条杀伤途径外，研究显示cd8+t细胞衍生的细胞外囊泡包含cd8+t细胞表面膜分子(cd3、tcr)以及颗粒酶，细胞因子等毒性物质，对靶细胞也具有一定的杀伤作用。
8、然而，到目前为止，尚没有关于trabd与细胞免疫相关的报道，更没有将trabd应用于免疫治疗的相关报道。
技术实现思路
1、针对上述技术问题，本专利技术一方面提供了一种单克隆抗体，其包含分别如seq idno.1和2所示的重链和轻链氨基酸序列，如seq id no.3和4所示的重链和轻链氨基酸序列，或如seq id no.5和6所示的重链和轻链氨基酸序列。
2、在本专利技术优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包含如seq id no.1和2所示的重链和轻链氨基酸序列。
3、本专利技术另一方面提供了编码所述重链氨基酸序列的核苷酸序列。
4、本专利技术另一方面提供了编码所述轻链氨基酸序列的核苷酸序列。
5、本专利技术另一方面提供了包含所述核苷酸序列的载体。
6、本专利技术另一方面提供了包含所述核苷酸序列或者所述载体的宿主细胞。
7、本专利技术另一方面提供了制备所述单克隆抗体的方法，包括在合适的条件下培养所述的宿主细胞，以及从细胞培养物中回收所述单克隆抗体的步骤。
8、本专利技术另一方面提供了trabd2a和trabd2b蛋白在作为免疫检查点中的应用。
9、本专利技术另一方面提供了所述单克隆抗体在作为免疫检查点抑制剂中的应用。
10、在本专利技术优选的实施方案中，所述trabd2a和trabd2b蛋白或者所述单克隆抗体应用于制备肿瘤检测试剂或抗肿瘤药物。
11、本专利技术另一方面提供了负载trabd2a和trabd2b蛋白的mddc细胞。
12、本专利技术另一方面提供了制备负载trabd2a和trabd2b蛋白的mddc细胞的方法，包括将mddc细胞与trabd2a和trabd2b蛋白相接触的步骤。
13、本专利技术另一方面提供了trabd2a和trabd本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种单克隆抗体，其包含分别如SEQ ID NO.1和2所示的重链和轻链氨基酸序列，如SEQ ID NO.3和4所示的重链和轻链氨基酸序列，或如SEQ ID NO.5和6所示的重链和轻链氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其包含分别如SEQ ID NO.1和2所示的重链和轻链氨基酸序列。
3.编码上述权利要求重链氨基酸序列的核苷酸序列。
4.编码上述权利要求轻链氨基酸序列的核苷酸序列。
5.包含上述权利要求所述的核苷酸序列的载体。
6.包含上述权利要求所述的核苷酸序列或者上述权利要求所述的载体的宿主细胞。
7.制备上述权利要求所述的单克隆抗体的方法，包括在合适的条件下培养上述权利要求所述的宿主细胞，以及从细胞培养物中回收所述单克隆抗体的步骤。
8.TRABD2A蛋白和TRABD2B蛋白在作为免疫检查点中的应用。
9.上述权利要求所述的单克隆抗体在作为免疫检查点抑制剂中的应用。
10.根据上述权利要求所述的应用，其中所述TRABD2A和TRABD2B蛋白或者所
11.负载TRABD2A和TRABD2B蛋白的MDDC细胞。
12.制备负载TRABD2A和TRABD2B蛋白的MDDC细胞的方法，包括将MDDC细胞与TRABD2A和TRABD2B蛋白相接触的步骤。
13.TRABD2A和TRABD2B蛋白封闭的T细胞。
14.制备TRABD2A和TRABD2B蛋白封闭的T细胞的方法，包括将T细胞与TRABD2A和TRABD2B双特异性抗体相接触的步骤。
...【技术特征摘要】
1.一种单克隆抗体，其包含分别如seq id no.1和2所示的重链和轻链氨基酸序列，如seq id no.3和4所示的重链和轻链氨基酸序列，或如seq id no.5和6所示的重链和轻链氨基酸序列。
2.根据权利要求1所述的单克隆抗体，其包含分别如seq id no.1和2所示的重链和轻链氨基酸序列。
3.编码上述权利要求重链氨基酸序列的核苷酸序列。
4.编码上述权利要求轻链氨基酸序列的核苷酸序列。
5.包含上述权利要求所述的核苷酸序列的载体。
6.包含上述权利要求所述的核苷酸序列或者上述权利要求所述的载体的宿主细胞。
7.制备上述权利要求所述的单克隆抗体的方法，包括在合适的条件下培养上述权利要求所述的宿主细胞，以及从细胞培养物中回收所述单克隆抗体的步骤。
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