一种酶突变体、级联催化合成手性S-4-芳基噁唑烷酮的方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种提高酶活的酶突变体，酶突变体为醇脱氢酶突变体和/或卤醇脱卤酶突变体，醇脱氢酶突变体在SEQ ID NO.1所示原始醇脱氢酶的序列中R位进行组合突变，R位为R1位、R2位、R3位和R4组合；或者，卤醇脱卤酶突变体为在SEQ ID NO.5所示原始卤醇脱卤酶的序列中第103位的亮氨酸突变为甘氨酸。本发明专利技术提供了一种全新的绿色生物合成路线，以2‑氯苯乙酮为底物，通过双酶级联催化合成S‑4‑芳基噁唑烷酮，产物的得率90％以上，ee值大于99％，区域选择性>99:1。本发明专利技术操作方便，原子经济性高，产率较高，在生物催化制备S‑4‑芳基噁唑烷酮具有较好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物，尤其是一种酶突变体、醇脱氢酶突变体及与卤醇脱卤酶级联催化合成手性s-4-芳基噁唑烷酮的方法和应用。

技术介绍

1、噁唑烷酮是一类含氧、氮的五元杂环化合物，常被用作杀菌剂、抗微生物剂，还是一类价值极高的药物中间体，可作为β-氨基酸的前体，在医学上具有广泛应用。其最早于1981年被报道，这之后越来越多的手性4-取代和4,5-取代-2-噁唑烷酮类化合物被用作手性助剂，在抗菌、抗哮喘、免疫抑制剂等方面有了临床有效性验证。利奈唑胺就是一种具有强抑菌作用的药物。其中s构型的4-芳基噁唑烷酮可以合成抗高胆固醇药物依折麦布，也是k-阿片受体激动剂cj-15161的关键中间体，具有很大利用价值。噁唑烷酮类抗生素是一类结构新颖的全合成类抗生素，主要作用于细菌合成蛋白质的初始阶段。因其独特的作用机制，在对抗革兰氏阳性菌方面有很强的抗菌活性，同时很少存在交叉耐药性问题，所以一直被人们广泛关注。

2、目前，手性噁唑烷酮及其衍生物的合成方法主要有化学法和生物法。以手性醇为原料进行化学环化具有危险系数高，造价昂贵等缺点，且对反应温度有较为严苛的限制，需要本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提高酶活的酶突变体，其特征在于：所述酶突变体为醇脱氢酶突变体和/或卤醇脱卤酶突变体，所述醇脱氢酶突变体在SEQ ID NO.1所示原始醇脱氢酶的序列中R位进行组合突变，所述R位为R1位、R2位、R3位和R4组合，所述R1位为第62位苯丙氨酸，R2位为第91位色氨酸、R3位为第209位赖氨酸、R4位为第249位丙氨酸：

2.根据权利要求1所述的酶突变体，其特征在于：所述原始醇脱氢酶来源于Pyrococcusfuriosus，命名PfADH，原始的核苷酸序列为SEQ ID NO.2所示；

3.如权利要求1或2所述的述酶突变体的编码基因，所述编码基因为SEQ I...

【技术特征摘要】

1.一种提高酶活的酶突变体，其特征在于：所述酶突变体为醇脱氢酶突变体和/或卤醇脱卤酶突变体，所述醇脱氢酶突变体在seq id no.1所示原始醇脱氢酶的序列中r位进行组合突变，所述r位为r1位、r2位、r3位和r4组合，所述r1位为第62位苯丙氨酸，r2位为第91位色氨酸、r3位为第209位赖氨酸、r4位为第249位丙氨酸：

2.根据权利要求1所述的酶突变体，其特征在于：所述原始醇脱氢酶来源于pyrococcusfuriosus，命名pfadh，原始的核苷酸序列为seq id no.2所示；

3.如权利要求1或2所述的述酶突变体的编码基因，所述编码基因为seq id no.4所示。

4.携带如权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐晴，黄和，薛锋，
申请(专利权)人：南京师范大学常州合成生物学产业研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：