【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种溶瘤腺病毒的矿化过程及其在治疗大肠癌中的应用；本专利技术还提供了制备所述矿化溶瘤腺病毒的方法。
技术介绍
1、大肠癌（colorectal cancer, crc）是最常见的消化道恶性肿瘤，也是全球肿瘤死亡的第二大原因。手术、放化疗、靶向治疗依然是大肠癌临床治疗的主要手段，可在一定程度上提高大肠癌患者的生存期，但总体效果并不理想，患者5年生存率徘徊于50%~60%。其中，约25%~30%的crc患者初诊时已发生转移，且超过50%的早期患者接受常规治疗后仍会复发转移，转移性肠癌患者的5年生存率仅约为20%。因此，开发创新手段提升临床疗效并使患者长期受益是突破大肠癌治疗瓶颈的关键。
2、溶瘤病毒疗法作为一种新型癌症治疗策略，在癌症治疗领域受到越来越多的关注。溶瘤病毒在恶性肿瘤中具有选择性复制能力，能靶向裂解肿瘤细胞，而对正常细胞不会引起明显的毒性作用。目前已在多种体内癌症模型和临床试验中得到证实，显示溶瘤腺病毒在肿瘤治疗中具有良好的安全性和耐受性。然而，局部用药（瘤内注射）的给药方式大大限制了溶瘤腺病毒的临床应用，且晚期大肠癌生物学特性极其复杂并常伴有远处转移，对于较小或隐匿性的转移灶无法局部注射溶瘤腺病毒。因而，采用静脉注射的方式给予溶瘤病毒进行全身治疗因临床可操作性强和理论上能将病毒传播至所有肿瘤部位而成为未来肿瘤病毒治疗的趋势。但进入血液的腺病毒在体内会受到免疫系统攻击，包括补体、细胞因子等，特别是中和抗体，从而使治疗效果大打折扣。因此，如何使溶瘤腺病毒躲避机体内免疫系统攻击
3、长期以来，金属药物在癌症的治疗中发挥了重要作用，如顺铂及其衍生物被用来治疗大约50%的癌症。近年来发现有些金属药物在产生细胞毒性的同时，还通过多种机制参与机体的免疫调节过程：包括增强免疫系统识别癌细胞的能力，改善免疫抑制性tme以及诱导肿瘤细胞的icd等。因此，开发一种金属掺杂仿生矿化的溶瘤腺病毒对于癌症的治疗具有重要的科学意义和临床转化价值。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的是在于提供一种矿化溶瘤腺病毒，以及其制备方法和应用，该矿化溶瘤腺病毒能够有效避免病毒被机体免疫系统清除，提高病毒的肿瘤靶向性和复制能力，还可通过激活sting通路以及促进dcs成熟来协同增强oa诱导的icd的效果，对于大肠癌的治疗具有重要的科学意义和临床转化价值。
2、具体而言，本专利技术提供了一种矿化溶瘤腺病毒，矿化后溶瘤腺病毒表面形成铜离子和锰离子结合的生物矿化涂层，呈现球体状，直径范围在110nm-140nm。
3、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述矿化溶瘤腺病毒的直径为120nm。
4、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述矿化溶瘤腺病毒的制备包括如下步骤：
5、步骤1：将溶瘤腺病毒颗粒与锰盐和盐铜溶液相混合孵育；
6、步骤2：将矿化的病毒使用超速离心法提纯得到矿化的溶瘤腺病毒。
7、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述锰盐和铜盐粉分别为mncl2和cucl2。
8、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
9、步骤1：将溶瘤腺病毒颗粒加入含有mncl2和cucl2的水溶液体系中，避光，边搅拌滴加pva溶液，避光孵育；
10、步骤2：孵育结束后，边搅拌边滴加na2co3溶液，然后，离心去除沉积杂质，取上清液，上清液超速离心，沉淀纳米颗粒，获得的沉淀纳米颗粒用ddh2o或pbs重悬，获得矿化溶瘤腺病毒纳米颗粒。
11、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
12、步骤1：将溶瘤腺病毒颗粒加入含有mncl2和cucl2的水溶液体系中，避光，边搅拌滴加pva溶液，避光孵育；其中mncl2和cucl2的摩尔比为9:1，避光孵育的温度为4℃，时间为4小时。
13、步骤2：孵育结束后，边搅拌边滴加na2co3溶液，然后，3000rpm离心5 分钟去除沉积杂质，取上清液，上清液15000g离心5 分钟，沉淀纳米颗粒，获得的沉淀纳米颗粒用ddh2o或pbs重悬，获得矿化溶瘤腺病毒纳米颗粒；其中步骤2均是在4℃条件下制备完成的。
14、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述步骤1中的溶瘤腺病毒颗粒为h101溶瘤腺病毒颗粒。
15、本专利技术还提供了一种矿化溶瘤腺病毒制备方法，包括如下制备步骤：
16、步骤1：将溶瘤腺病毒颗粒与cucl2和mncl2溶液相混合孵育；
17、步骤2：将矿化的病毒使用超速离心法提纯得到矿化的溶瘤腺病毒。
18、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
19、步骤1：将溶瘤腺病毒颗粒加入含有mncl2和cucl2的水溶液体系中，避光，边搅拌滴加pva溶液，t1℃避光孵育t1小时；
20、步骤2：孵育结束后，t2℃边搅拌边滴加na2co3溶液，然后，以转速n1离心t2分钟去除沉积杂质，取上清液，上清液以转速n2离心t3分钟离心，沉淀纳米颗粒，获得的沉淀纳米颗粒用ddh2o或pbs重悬，获得矿化溶瘤腺病毒纳米颗粒。
21、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述步骤1中mncl2和cucl2的摩尔比为9:1；t1=4；t1=4；
22、所述步骤2中t2=4；n1=3000rpm；t2=5；n2=3000rpm；t2=5。
23、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述pva溶液为1%pva溶液。
24、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述pva溶液为1%pva溶液，na2co3溶液浓度为20mm，pva溶液和na2co3溶液的体积比为1:1。
25、在本专利技术的一些具体实施方案中，制备方法中所述步骤1中的溶瘤腺病毒颗粒为h101溶瘤腺病毒颗粒。
26、本专利技术还提供了一种治疗癌症的药物，其包含上述矿化溶瘤腺病毒或上述矿化溶瘤腺病毒制备方法制备的矿化溶瘤腺病毒。
27、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述癌症包括但不限于肺转移、肝转移等癌症。
28、在本专利技术的一些具体实本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种矿化溶瘤腺病毒，其特征在于：矿化后溶瘤腺病毒表面形成铜离子和锰离子结合的生物矿化涂层，呈现球体状，直径范围在110nm-140nm。
2.如权利要求1所述矿化溶瘤腺病毒，其特征在于，所述矿化溶瘤腺病毒的制备包括如下步骤：
3.如权利要求2所述矿化溶瘤腺病毒，其特征在于，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
4.一种矿化溶瘤腺病毒制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
5.如权利要求4所述矿化溶瘤腺病毒制备方法，其特征在于，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
6.如权利要求5所述矿化溶瘤腺病毒制备方法，其特征在于，
7.一种治疗癌症的药物，其特征在于，包含权利要求1-3中任一项所述的矿化溶瘤腺病毒或权利要求4-6任一项所述的矿化溶瘤腺病毒制备方法制备的矿化溶瘤腺病毒。
8.如权利要求9所述治疗癌症的药物，其特征在于，所述癌症为结直肠癌。
9.一种治疗结直肠癌的药物组合物，其特征在于，包含权利要求1-3中任一项所述的矿化溶瘤腺病毒或权利要求4-6任一项所述的矿化溶瘤腺病毒制
10.权利要求1-3中任一项所述的矿化溶瘤腺病毒或权利要求4-6任一项所述的矿化溶瘤腺病毒制备方法制备的矿化溶瘤腺病毒在制备癌症治疗的药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种矿化溶瘤腺病毒，其特征在于：矿化后溶瘤腺病毒表面形成铜离子和锰离子结合的生物矿化涂层，呈现球体状，直径范围在110nm-140nm。
2.如权利要求1所述矿化溶瘤腺病毒，其特征在于，所述矿化溶瘤腺病毒的制备包括如下步骤：
3.如权利要求2所述矿化溶瘤腺病毒，其特征在于，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
4.一种矿化溶瘤腺病毒制备方法，其特征在于，包括如下制备步骤：
5.如权利要求4所述矿化溶瘤腺病毒制备方法，其特征在于，所述矿化溶瘤腺病毒的具体制备步骤如下：
6.如权利要求5所述矿化溶瘤腺病毒制备方法，其特征在于，
【专利技术属性】
技术研发人员：牟晓洲，李亦舒，蔡宇，李珂，琚姝，劳家颂，段长松，
申请(专利权)人：浙江省人民医院，
类型：发明
国别省市：
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