一种提高纤维素酶活性的基因工程菌及其构建方法与应用技术

技术编号：41295722 阅读：31 留言：0更新日期：2024-05-13 14:45

本发明专利技术涉及一种提高纤维素酶活性的基因工程菌及其构建方法与应用。本发明专利技术以枯草芽孢杆菌为出发菌，过表达内切葡聚糖酶C36基因；所述C36基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。经检测，以CMC‑Na为底物时，测得基因工程菌的CMC酶活为52.88U/mL，FPA酶活为30.81U/mL。相比于阴性对照菌株PMB‑BS(转化空载体的枯草芽孢杆菌)，CMC酶活增加了4.6倍，FPA酶活增加了1.6倍。本发明专利技术提供的基因工程菌显著提高了纤维素酶产量和酶活，适合在工业中大规模生产使用。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种提高纤维素酶活性的基因工程菌及其构建方法与应用，属于微生物基因工程。

技术介绍

1、纤维素是烟叶结构的主要成分，与半纤维素和木质素共同构成烟草细胞壁，决定了烟叶的完整性，同时其含量也与烟叶品质相关。在烟叶燃烧过程中，纤维素可以增强烟叶的持火力；但是当烟叶中纤维素含量过多时，会使烟叶组织变的粗糙且易破碎，影响加工可塑性，也会导致烟叶燃烧时刺激性增大，杂气变重，香气被掩盖。而且纤维素在不完全燃烧时会产生有害物质，例如大量纤维素在超过600℃时会裂解产生稠环芳烃。因此，探索安全有效的技术降解烟叶中的纤维素，使其转化成水溶性的还原糖等小分子物质，进而提高烟叶的质量及安全性，已成为大家普遍关注的问题。

2、微生物或酶制剂发酵技术能够有效降低烟叶中纤维素的含量，促进烟草薄片、烟叶以及烟梗内部的有机物大分子的分解以及转化，减少亚硝酸、苯并芘等有害物质的产生。国内外学者对醇化烟叶中起主要作用的微生物以及纤维素酶进行了广泛研究，但是目前获得的纤维素菌株大都存在产酶能力低、稳定性以及分解能力相对较差等问题。

3、申...

【技术保护点】

1.一种提高纤维素酶活性的基因工程菌，其特征在于：所述工程菌以枯草芽孢杆菌为出发菌，过表达内切葡聚糖酶C36基因；所述C36基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.一种如权利要求1所述的提高纤维素酶活性的基因工程菌的构建方法，其特征在于：构建表达内切葡聚糖酶C36基因的重组表达载体，转化入枯草芽孢杆菌中，使内切葡聚糖酶C36基因过表达。

3.根据权利要求2所述的提高纤维素酶活性的基因工程菌的构建方法，其特征在于：所述重组表达载体的构建为：将获得的内切葡聚糖酶C36基因与线性化的出发载体通过同源重组进行连接，获得重组表达载体。