【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于蛋白质提取，具体涉及一种反胶束萃取法提取白酒酒糟中蛋白质的方法及试剂组合物。
技术介绍
1、白酒糟是高粱和玉米等粮食作物经过发酵、蒸馏生产白酒而产生的一种混合的固体废物，是我国产量最多的酒糟，也是酿酒行业最主要的副产物，年产量约为4000-5000万吨。白酒糟中富含大量淀粉、蛋白质、氨基酸、脂肪和维生素等营养成分，以及钙、磷、钾等无机营养元素。目前酒糟的主要应用是开发成饲料、沼气、肥料和白炭黑等，酒糟中所含的大量营养物质未能得到充分利用，不仅造成了极大的资源浪费，还造成了环境压力。因此，对酒糟中有效成分进行提取和研究，是实现酒糟的高附加值利用的有效途径。
2、醇溶蛋白主要存在于高粱、小麦、玉米、水稻等谷物中，是一种疏水性贮藏蛋白，含有50％以上的疏水氨基酸，可溶于体积分数为60％-95％的醇类水溶液中。由于醇溶蛋白中疏水性氨基酸含量高，有较多的含硫氨基酸，使其具有独特的特性，有较强的亲油性和溶解性，易溶于乙醇、正丙醇和异丙醇等非极性溶剂中。醇溶蛋白具有很好的生物降解能力、生物相容性和良好的耐水性、耐热性、成膜性、耐脂性、高胶凝能力和溶剂诱导的自组装性等，因此广泛用于食品、医药、纺织、造纸等工业。醇溶蛋白还可通过酶解技术制备出具有生物活性的多肽，用于药物制剂生产。此外，醇溶蛋白在新型生物医学材料领域，如用作活性成分载体、稳定乳液、传递药物等也有很好的应用前景。
3、研究发现白酒糟中蛋白质干基含量较高，可达到20～30％，其中醇溶蛋白占比最高，可占总蛋白的40％-60％。目前酒糟醇溶蛋白的提取方
4、反胶束中表面活性剂分子的非极性基团朝外，极性基团朝内，其中心溶解水分子形成类生命环境的水核。反胶束的水核半径从几纳米至上百纳米，可溶解生物大分子比如蛋白质，乃至细胞器、细胞，并且保持其生物活性。反胶束独特的“水核”可以促进目标蛋白的纯化。反胶束萃取就是利用反胶束“水核”，将目标物质溶解在“水核”内，从水相转移至反胶束相，从而实现目标物质的分离纯化。反胶束也是一种新颖、温和的提取技术，可以同时将油和蛋白质从含油材料中分离出来，并且易于分离放大。反胶束纯化蛋白质包括两个步骤：前萃和反萃。前萃过程：目标生物大分子从主体溶液(水相)进入到反胶束溶液(有机相)，溶解于反胶束水池的过程；反萃过程：目标生物大分子从反胶束溶液(有机相)转移至第二水相的过程。反胶束萃取生物大分子受到多种因素的影响，包括溶液ph、盐的浓度和离子种类、表面活性剂浓度等，改变这些参数可以选择性分离目标蛋白质。目前反胶束已应用于多种领域提取植物蛋白质，比如大豆蛋白、花生蛋白、核桃蛋白、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶等，尤其在食品科学领域得到广泛应用。
5、目前未见利用反胶束萃取技术从白酒糟中提取醇溶蛋白的文献或专利报道。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种基于反胶束萃取法提取白酒糟中的醇溶蛋白的方法，该方法可以实现白酒糟中醇溶蛋白的有效分离，并且分离出的蛋白质纯度高、质量好。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、基于反胶束萃取法提取白酒糟中的醇溶蛋白的方法，所述方法包括如下步骤：
4、s1：采用醇碱法对酒糟中的蛋白质进行提取，得到上清液；所述上清液经冻干、脱脂、干燥得酒糟醇溶蛋白粉末；
5、s2：向s1所得酒糟醇溶蛋白粉末中加入反胶束体系进行前萃，得到前萃液；
6、所述反胶束体系包括反胶束萃取剂和磷酸盐缓冲液a；所述反胶束萃取剂由阳离子表面活性剂、有机溶剂组成，所述阳离子表面活性剂为dtab(十二烷基三甲基溴化铵，分子量为308.3)；
7、s3：向s2所得前萃液中加入磷酸盐缓冲液b进行反萃，得到酒糟醇溶蛋白。
8、进一步，所述反胶束萃取剂的浓度为0.01-0.05m，优选为0.02m。
9、进一步，所述有机溶剂为正辛烷和正己醇，所述正辛烷和正己醇的体积比为4-6：1，优选为5：1。
10、进一步，所述磷酸盐缓冲液a由体积分数为30％-50％的乙醇、ph值为7.5-8.5的pbs缓冲液和浓度为0.3m-0.45m的盐酸胍组成。
11、优选地，所述磷酸盐缓冲液a由体积分数为30％的乙醇、ph值为8.5的pbs缓冲液和浓度为0.4m的盐酸胍组成。
12、进一步，所述磷酸盐缓冲液b由体积分数为70％-80％的乙醇、ph值为7.0-9.0的pbs缓冲液和浓度为0.1m-0.25m的kbr组成。
13、优选地，所述磷酸盐缓冲液b由体积分数为75％的乙醇、ph值为8.5的pbs缓冲液和浓度为0.2m的kbr组成。
14、进一步，s2中，所述酒糟醇溶蛋白粉末与反胶束萃取剂和磷酸盐缓冲液a的料液比为0.01-0.03g：10-30ml：10-30ml，优选为0.01g：10ml：10ml。
15、进一步，s3中，所述前萃液和磷酸盐缓冲液b的体积比为1：1-3，优选为1：1。
16、进一步，所述醇碱法是向白酒酒糟粉末中加入提取剂，进行冷凝回流提取，离心获得上清液；所述提取剂由偏重亚硫酸钠、氢氧化钠和乙醇水溶液组成；所述偏重亚硫酸钠的质量浓度为4-6g/l，优选为5g/l，所述氢氧化钠的质量浓度为3-4g/l，优选为3.5g/l，所述乙醇水溶液的体积分数60％-80％，优选为70％。
17、进一步，所述白酒酒糟粉末和提取剂的料液比为1g：10ml。
18、进一步，所述离心次数为两次；第一次离心所得上清液，加入去离子水使上清液中乙醇体积分数为40％；再进行第二次离心。
19、进一步，离心温度为4℃，离心时间为10min，离心力为3500xg。
20、进一步，s1中，采用正己烷对冻干后的酒糟粉末进行脱脂，料液比为1g：8-12ml，优选为1g：10ml，脱脂时间30-40min；重复脱脂至上层液体澄清透明。
21、本专利技术的目的之二在于提供一种用于反胶束萃取白酒糟中的醇溶蛋白的试剂组合物。
22、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
23、用于反胶束萃取白酒糟中的醇溶蛋白的试剂组合物，待测样品为白酒糟；所述试剂组合物包括如下1)-2)中的任一种或多种；
24、1)用于反胶束前萃的反胶束萃取剂和磷酸盐缓冲液a；
25、2)用于反胶束反萃的磷酸盐缓冲液b；
26、所述反胶束萃取剂由dtab、正辛烷和正己醇组成；所述反胶束萃取剂的浓度为0.02m；所述正辛烷和正己醇的体积比为5：1；所述磷酸盐缓冲液a由体积分数为30％的乙醇、ph值为8.5的pbs缓冲液和浓度为0.4m的盐酸胍组成；所本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于反胶束萃取法提取白酒糟中的醇溶蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反胶束萃取剂的浓度为0.01-0.05M。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂包括正辛烷和正己醇，所述正辛烷和正己醇的体积比为4-6：1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液A由体积分数为30％-50％的乙醇、pH值为7.5-8.5的PBS缓冲液、浓度为0.3M-0.45M的盐酸胍组成。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液B由体积分数为70％-80％的乙醇、pH值为7.0-9.0的PBS缓冲液和浓度为0.1-0.25M的KBr组成。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S2中，所述酒糟醇溶蛋白粉末与反胶束萃取剂和磷酸盐缓冲液A的料液比为0.01-0.03g：10-30mL：10-30mL。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S3中，所述前萃液和磷酸盐缓冲液B的体积比为1：1-3。
8.根
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，S1中，采用正己烷对冻干后的酒糟粉末进行脱脂，料液比为1g：8-12mL，脱脂时间30-40min。
10.用于反胶束萃取白酒糟中的醇溶蛋白的试剂组合物，其特征在于，待测样品为白酒糟；
...【技术特征摘要】
1.基于反胶束萃取法提取白酒糟中的醇溶蛋白的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反胶束萃取剂的浓度为0.01-0.05m。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂包括正辛烷和正己醇，所述正辛烷和正己醇的体积比为4-6：1。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液a由体积分数为30％-50％的乙醇、ph值为7.5-8.5的pbs缓冲液、浓度为0.3m-0.45m的盐酸胍组成。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液b由体积分数为70％-80％的乙醇、ph值为7.0-9.0的pbs缓冲液和浓度为0.1-0.25m的kbr组成。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，s2中，所述酒糟醇溶蛋白粉末与...
【专利技术属性】
技术研发人员：余婷婷，刘义，陈咏梅，胡楠，胡丛武，
申请(专利权)人：四川轻化工大学，
类型：发明
国别省市：
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