【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药工程领域，特别涉及一种hpv疫苗组合物及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。
技术介绍
1、人乳头瘤病毒(human papillomavirus，hpv)是一种无包膜的闭环双链dna病毒，属乳多空病毒科多瘤病毒亚科，主要侵犯人体的上皮黏膜组织，进而诱发各种良性及恶性增生病变。目前已鉴定出来的不同亚型hpv超过200种，hpv感染具有明显的组织特异性，不同型别的hpv对于皮肤和黏膜的嗜向性不同，能诱发不同的乳头状病变，大约有30多种hpv型别与生殖道感染有关，其中有20多种与肿瘤相关。
2、接种预防性hpv疫苗是预防宫颈癌有效可行的预防手段，目前已上市疫苗都是基于hpv主要衣壳蛋白l1形成的病毒样颗粒(virus-like particle，vlp)为抗原的疫苗，通过基因重组表达的l1蛋白可在一定条件下形成类似病毒的vlp。作为疫苗重要组成部分的佐剂主要是铝盐佐剂，其通过抗原储库效应和诱发炎症等免疫刺激效应发挥增强免疫应答的作用。然而，铝盐佐剂也存在着一系列局限性，例如无法诱导细胞免疫应答，抗原提呈效果不理想、免疫应答产生时间滞后，易引发副反应等。
3、乳剂型佐剂(包括水包油乳剂、油包水乳剂等)是新型佐剂的一个重要分支，乳剂可联合多种弱抗原(重组蛋白、多肽等)使用，并诱发高滴度的抗原特异性抗体。乳剂型佐剂通常包含油相成分、水相成分和乳化剂。其中，水包油乳剂以水相成分为主，人体耐受性较高，且与多数疫苗抗原的相容性较好。
4、尽管乳剂型佐剂和铝佐剂都已经被广泛使用，但迄
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种安全性和免疫刺激活性好，方便配制的，成本低廉的，能够快速诱导高效免疫应答的hpv疫苗组合物。同时本专利技术提供简便的制备方法和具有广阔前景的应用。
2、为了达到上述目的，本专利技术一方面提供一种hpv疫苗组合物，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含hpv抗原和铝佐剂，所述第二组分包含水包油乳剂佐剂，所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
3、hpv的衣壳是由主要衣壳蛋白l1和次要衣壳蛋白l2组成。已上市疫苗都是基于hpvl1病毒样颗粒(virus-like particle，vlp)为抗原的疫苗，通过基因重组表达的l1蛋白可在一定条件下形成类似病毒的颗粒，有着较好的免疫原性。
4、在本专利技术中，来源于人乳头瘤病毒(hpv)的抗原为各型别hpv的l1蛋白和/或l2蛋白。在本专利技术的实施方式中，hpv可以为低危型hpv(例如hpv6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81、89)，中等风险型hpv(例如hpv26、53、66、73、82)，或者高危型hpv(例如hpv16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。在优选的实施方式中，所述抗原包含hpv6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的l1蛋白和/或l2蛋白。
5、在ncbi数据库中，已有许多现有的hpv各型l1蛋白(hpv 6l1、11l1、16l1、18l1、31l1、33l1、45l1、52l1及58l1)序列可供本领域技术人员进行选择，这些序列均可以作为抗原蛋白的理想选择基础。在本专利技术的一些实施方式中，采用了具有高度的保守性的序列，具体情况如下：hpv 6l1的氨基酸序列已于1995年在ncbi数据库中收录，登录号为aaa74218.1；hpv 11l1的氨基酸序列已于1994年在ncbi数据库中收录，登录号为aaa46935.1；hpv 16l1的氨基酸序列已于1998年在ncbi数据库中收录，登录号为aac09292.1；hpv 18l1蛋白的氨基酸序列已于2003年在ncbi数据库中收录，登录号为aaq92369.1；hpv 31l1蛋白的氨基酸序列已于1994年在ncbi数据库中收录，登录号为aaa46956.1；hpv 33l1蛋白的氨基酸序列已于2009年在ncbi数据库中收录，登录号为acl12333.1；hpv 45l1蛋白的氨基酸序列已于2009年在ncbi数据库中收录，登录号为abp99831.1(截短了n端26个氨基酸，上述26个氨基酸为疏水区，疏水区可能影响l1蛋白形成vlp，故而截短)；hpv52 l1蛋白的氨基酸序列已于2005年在ncbi数据库中收录，登录号为caa52590.1(截短了n端27个氨基酸，上述27个氨基酸为疏水区，疏水区可能影响l1蛋白形成vlp，故而截短)；hpv 58l1蛋白的氨基酸序列已于2009年在ncbi数据库中收录，登录号为cax48979.1。需要说明的是，本专利技术中的抗原并不限于具有上述氨基酸序列的l1蛋白，可以是具有免疫原性的其它l1蛋白，包括已上市疫苗所采用的l1蛋白。
6、根据本专利技术的一些实施方式，第一组分中抗原hpv各型l1和/或l2蛋白的含量在1-100μg之间，更优选在5-50μg之间，例如10μg、20μg、30μg或40μg。
7、在一些实施方式中，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
8、在一些实施方式中，所述第一组分中铝佐剂的含量约在10-1000μg之间，优选在50-800μg之间，更优选在100-600μg之间，例如200μg、300μg、400μg或500μg。
9、在一些实施方式中，所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
10、在一些实施方式中，所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
11、在一些实施方式中，所述第一组分是hpv疫苗成品制剂，例如市售的二价、四价、九价或更高价次的hpv疫苗。
12、在一些实施方式中，所述水包油乳剂佐剂包含5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚和2-10mg吐温80，优选地，所述水包油乳剂佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚和4.86mg吐温80。
13、在一些实施方式中，所述水包油乳剂佐剂的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
14、在一些实施方式中，所述水包油乳剂佐剂进一步包含mpl、皂苷、poly i:c和cpg中的一种或多种。
15、本专利技术同时提供所述hpv疫苗组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
16、(i)制备包含hpv抗原和铝佐剂的第一组分；
17、(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油乳剂佐剂；
18、(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装，制得hpv疫苗组合物。
19、其中步骤(i)和(ii)可以以任意顺序进行，包括先后进行、同时进行或分场地进行。
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1.一种疫苗组合物，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂，所述第二组分包含水包油乳剂佐剂，所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述HPV抗原包含HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的L1蛋白和/或L2蛋白。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分中HPV各型L1和/或L2蛋白的含量在1-100μg之间，更优选在5-50μg之间。
4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分中铝佐剂的含量在10-1000μg之间，优选在50-800μg之间。
6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其特
8.根据权利要求1-7任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分为HPV疫苗成品制剂，例如市售的二价、四价、九价或更高价次的HPV疫苗。
9.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述水包油乳剂佐剂包含5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚和2-10mg吐温80，优选地，所述水包油乳剂佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚和4.86mg吐温80。
10.根据权利要求1或9所述的疫苗组合物，其特征在于，所述水包油乳剂佐剂的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
11.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述水包油乳剂佐剂进一步包含MPL、皂苷、poly I：C和CpG中的一种或多种。
12.一种权利要求1-11任一项所述疫苗组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
13.权利要求1-11任一项所述HPV疫苗组合物在制备用于治疗或预防疾病的药物中的用途。
14.一种包含权利要求1-11任一项所述疫苗组合物的试剂盒，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂，所述第二组分包含水包油乳剂佐剂，所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
15.一种包含权利要求1-11任一项所述疫苗组合物的多室注射器，其特征在于，包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室装有第一组分，所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂；第二隔室装有第二组分，所述第二组分包含水包油乳剂佐剂，所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
...【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含hpv抗原和铝佐剂，所述第二组分包含水包油乳剂佐剂，所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述hpv抗原包含hpv6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的l1蛋白和/或l2蛋白。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分中hpv各型l1和/或l2蛋白的含量在1-100μg之间，更优选在5-50μg之间。
4.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分中铝佐剂的含量在10-1000μg之间，优选在50-800μg之间。
6.根据权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
8.根据权利要求1-7任一项所述的疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分为hpv疫苗成品制剂，例如市售的二价、四价、九价或更高价次的hpv疫苗。
...【专利技术属性】
技术研发人员：姚文荣，班靖洋，刘娟，袁楚晓，吴双，洪坤学，刘勇，
申请(专利权)人：江苏瑞科生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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