【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体是一种银杏叶多糖在制备治疗或预防hcmv药物中的应用。
技术介绍
1、人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,hcmv)属于疱疹病毒β亚科，hcmv是最大的一类疱疹病毒，病毒直径大小200nm左右，其基因组由235kb双链dna(dsdna)组成，至少编码165个以上的病毒相关蛋白。hcmv在人群中普遍易感，与其他人类疱疹病毒一样，hcmv在感染后不会被完全清除，而是在宿主体内潜伏，在免疫力低下或者器官移植病人中，极易发生激发感染，加重病情。同时，hcmv感染也是造成孕妇流产以及新生儿先天性疾病的主要病原体，引起小头畸形、黄疸性肝炎、智力低下、失明、认知障碍等。因此，hcmv感染造成了严重的社会和医疗负担。
2、虽然hcmv疫苗研发取得了一些进展，但是目前还没有成熟的疫苗获准上市，抗病毒药物是临床上唯一的选择，其中更昔洛韦(ganciclovir，gcv)、膦甲酸(foscarnet，fos或pfa)和西多福韦(cidofovir，cdv)是临床批准的用于治疗hcmv感染的主要药物，这些药物主要是通过抑制病毒dna聚合酶发挥抗hcmv的作用。但是这些药物具有骨髓抑制、肾毒性和电解质紊乱等不良反应，同时临床上出现的一些耐药毒株，都显著降低了这些药物使用的效果，限制了其在临床上的应用。综上所述，对人巨细胞病毒感染进行有效的预防以及对感染者进行积极有效的治疗，是提高出生人口素质和提高免疫力低下老年人生活质量的重要手段。
3、银杏(ginkgo biloba l.)别
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术通过从银杏叶中提取多糖gp，进行了系列的生物学实验，目的是提供一种毒副作用小，安全有效的抑制hcmv的药物。
2、本专利技术的目的通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术提供了银杏叶多糖gp在制备治疗和/或预防hcmv感染药物中的用途。
4、所述银杏叶多糖的制备方法包括如下步骤：
5、1)采摘新鲜银杏叶，剪除枝茎，反复冲洗至洁净后漏网晾干；
6、2)晾干的银杏叶放置到托盘中自然干燥，随后将银杏叶放入烘干箱中于70℃恒温干燥；
7、3)将完全烘干的银杏叶粉碎后过80目筛得粉末；
8、4)称量银杏叶粉末，将银杏叶粉末加入到三颈圆底烧瓶中，加入石油醚；组装好冷凝回流装置，将三颈圆底烧瓶放置到水浴锅中，水浴锅温度为70℃，恒温回流脱脂1次，此过程耗时1h；
9、5)脱色后银杏叶粉末加入蒸馏水，100℃恒温煮沸提取2h；
10、6)将料液使用尼龙布过滤出滤渣重新准备再提取一次，提取过程要求与第一次相同，重复提取1h后再次使用尼龙布过滤，合并两次滤液；
11、7)合并的滤液随后使用循环水真空泵过滤，滤液使用旋转蒸发仪浓缩，装入到截留分子量为500da的透析袋中透析，使用旋转蒸发仪浓缩后以1：4的体积比例倒入酒精开始醇沉，静置过夜，抽滤后烘干称重。
12、所述的应用，步骤4)中银杏叶粉末与石油醚的重量体积比为1:5。
13、所述的应用，步骤5)中银杏叶粉末与蒸馏水的重量体积比为1:15。
14、银杏叶多糖gp通过对hcmv立即早期蛋白ie1/2，早期蛋白p52以及立即早期基因ul123、早期基因ul44和晚期基因ul32的dna拷贝数的抑制来抑制hcmv。
15、银杏叶多糖gp可以显著保护hcmv感染引起的细胞病变效应。
16、本专利技术生物学实验的研究结果表明：
17、1、银杏叶多糖gp单独处理hcmv宿主细胞wi-38，在1.5625μg/ml、3.125μg/ml、6.25μg/ml、12.5μg/ml、25μg/ml的浓度梯度对wi-38没有表现出明显的细胞毒性，当银杏叶多糖gp的浓度达到50μg/ml、100μg/ml、200μg/ml时会表现出细胞毒性。
18、2、银杏叶多糖gp在5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的浓度都能够缓解hcmv引起的wi-38细胞病变效应，特别是10μg/ml、20μg/ml的浓度效果最明显；其中20μg/ml银杏叶多糖gp处理的效果与200μg/ml的阳性药物pfa效果相当。
19、3、银杏叶多糖gp在10μg/ml、20μg/ml的浓度都能够显著抑制hcmv立即早期蛋白ie1/2以及早期蛋白p52在wi-38中的表达。与单独接种hcmv的组别相比较，5μg/ml的浓度可以抑制ie1/2和p52表达水平分别至84％(p>0.05，差异不显著)和78％(p>0.05，差异不显著)；10μg/ml的浓度可以抑制ie1/2和p52表达水平分别至66％(**p<0.01，差异极显著)和59％(**p<0.01，差异极显著)；当gp浓度达到20μg/ml时，可以抑制ie1/2和p52表达水平分别至44％(*p<0.05，差异显著)和30％(***p<0.001，差异极其显著)。
20、4、银杏叶多糖gp在5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml的浓度可以降低hcmv立即早期基因ul123、早期基因ul44和晚期基因ul32的dna拷贝数。与单独接种hcmv的组别相比较，5μg/ml的浓度可以抑制早期基因ul44拷贝数至78％(**p<0.01，差异极显著)，抑制晚期基因ul32的dna拷贝数至81％(*p<0.05，差异显著)；10μg/ml的浓度可以抑制早期基因ul123拷贝数至80％(*p<0.05，差异显著)，抑制早期基因ul44的dna拷贝数至71％(**p<0.01，差异极显著)，抑制晚期基因ul32的dna拷贝数至65％(**p<0.01，差异极显著)；20μg/ml的浓度可以抑制早期基因ul123拷贝数至72％(*p<0.05，差异显著)，抑制早期基因ul44的dna拷贝数至64％(***p<0.001，差异极其显著)，抑制晚期基因ul32的dna拷贝数至66％(**p<0.01，差异极显著)。
21、本专利技术所述的药物还包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
22、本专利技术所述的药物的制剂为液体制剂、固体制本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.银杏叶多糖在制备治疗或预防HCMV药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于银杏叶多糖通过对HCMV立即早期蛋白IE1/2，早期蛋白p52以及立即早期基因UL123、早期基因UL44和晚期基因UL32的DNA拷贝数的抑制来抑制HCMV。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物还包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
4.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物的制剂为液体制剂、固体制剂或半固体制剂。
5.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述银杏叶多糖的制备方法包括如下步骤：
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于步骤4）中银杏叶粉末与石油醚的重量体积比为1:5。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于步骤5）中银杏叶粉末与蒸馏水的重量体积比为1:15。
【技术特征摘要】
1.银杏叶多糖在制备治疗或预防hcmv药物中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于银杏叶多糖通过对hcmv立即早期蛋白ie1/2，早期蛋白p52以及立即早期基因ul123、早期基因ul44和晚期基因ul32的dna拷贝数的抑制来抑制hcmv。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述药物还包括药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王三应，张冬艳，张忠山，毛根祥，林萍，苏慧丽，吴辛娜，周叙强，
申请(专利权)人：浙江医院，
类型：发明
国别省市：
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