【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及基于体内树突状细胞“搭便车”用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗制备的一种用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法及应用。
技术介绍
1、肿瘤疫苗是利用抗原呈递细胞将肿瘤抗原摄取并经加工后呈递给t淋巴细胞，进而激活机体免疫诱导肿瘤细胞死亡的一种治疗方式，具有特异性高、毒性低和不良反应少的特点，是替代或辅助传统疗法以提高疗效的良好选择。虽然多项临床试验已经证明了癌症疫苗的安全性和免疫原性，但临床应答情况在很大程度上令人失望。其中，淋巴结是启动适应性免疫应答的关键部位。间质给药（例如肌肉内、皮下和皮内给药）是目前疫苗临床试验的主要给药途径，但由于间质内动态的生理环境产生复杂的给药屏障，大多数疫苗仍然停留在外周注射部位，因此对淋巴结的靶向能力相对较差。与此同时，疫苗与毛细血管一起被清除，以及其他类型细胞可能对疫苗的内吞作用也会降低疫苗向淋巴结递送的效力。因此，迫切需要一种有效的疫苗递送策略来增强淋巴结的靶向性和临床疗效。
2、近年来，由于调控纳米疫苗的理化特性（例如大小、电荷和变形能力），可延长输入药物的循环时间或提高跨不同屏障的转运效率，以提高其通过淋巴系统从外周组织转运到淋巴器官的靶向效率。然而，由于淋巴结是一个没有中心驱动力的单向传输网络，因此纳米颗粒只能被动地流入淋巴管，这限制了淋巴结的靶向递送效率。此外，即使通过淋巴管进入淋巴结，内皮质区仍然存在直径为3~5 nm的狭窄导管，仅允许分子量小于70 kda的小分子或极小颗粒（2~5 nm）进入淋巴结深部。目前研究中，尽管
技术实现思路
1、针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法及应用，可有效解决现有并未有通过“搭乘”体内树突状细胞实现抗原主动向淋巴结富集，提高抗原免疫治疗效能的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术解决的技术方案是，一种用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法及应用，该疫苗是以海藻酸钠水凝胶为载体，共装载dspe-ova和gm-csf制成，具体包括以下步骤：
3、s1、取卵清白蛋白多肽（ova）、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺（dspe）和4-二甲氨基吡啶（dmap），在超声条件下溶解于二甲基亚砜中，其中，所述的卵清白蛋白多肽、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1:1-1.5:2-2.5，35-55 ℃下搅拌反应70 -75 h，反应结束后，通过透析袋透析40-50 h，随后冷冻干燥，得dspe-ova（二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-卵清白蛋白多肽）；
4、s2、取海藻酸钠加入到去离子水中，35-55 ℃下搅拌反应3-5 h，得浓度为8-15mg/ml的海藻酸钠水溶液；
5、s3、向海藻酸钠水溶液中加入10-20 mg/ml 的gm-csf（小鼠粒细胞—巨噬细胞集落刺激因子）和10-20 mg/ml 的dspe-ova， 800-1200 rpm/min搅拌2-5 min，得复合水凝胶疫苗。
6、所述的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的分子量为2000-3000。
7、所述的卵清白蛋白多肽作为模式抗原，不限于使用其他肿瘤细胞的抗原。
8、所述的步骤s1中透析袋的截留分子量为2000-2500，透析介质为0.01 m的nahco3溶液。
9、所述方法制备的复合水凝胶疫苗在制备治疗肿瘤药物或防治肿瘤抗原疫苗中的应用。
10、所述的肿瘤抗原为黑色素瘤、淋巴瘤、结直肠癌、肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、前列腺癌、食管癌、宫颈癌、膀胱癌、卵巢癌、子宫内膜癌或肾癌的一种或多种。
11、所述的防治肿瘤抗原疫苗为注射制剂。
12、本专利技术制备方法简单，可以在不损伤细胞活力以及信号传导的情况下进行抗原修饰，增强向淋巴结的递送剂量，触发强有力的适应性免疫信号，进一步延长临床疫苗免疫刺激的持久性，社会和经济效益显著。
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1.一种用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，该疫苗是以海藻酸钠水凝胶为载体，共装载DSPE-OVA和GM-CSF制成，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求1-5任一项所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，所述的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺的分子量为2000-3000。
7. 根据权利要求1-5任一项所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，所述的步骤S1中透析袋的截留分子量为2000-2500，透析介质为0.01M的NaHCO3溶液。<...
【技术特征摘要】
1.一种用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，该疫苗是以海藻酸钠水凝胶为载体，共装载dspe-ova和gm-csf制成，具体包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.根据权利要求1-5任一项所述的用于抗原主动淋巴结递送的复合水凝胶疫...
【专利技术属性】
技术研发人员：史进进，周蕾，薛大禹，宋庆迎，张新，张开翔，刘军杰，王梦瑶，毛美华，齐续，
申请(专利权)人：郑州大学，
类型：发明
国别省市：
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