生产富含干细胞样中央记忆表型T细胞的人类嵌合抗原受体T细胞的方法技术

本发明专利技术提供一种生产富含干细胞样中央记忆表型T细胞(Tscm)的人类嵌合抗原受体T细胞的方法：提供人类周边血液单核细胞；纯化人类T细胞：将表面含有抗CD3/CD28抗体的磁珠加入人类周边血液单核细胞，得到人类T细胞与磁珠复合物；活化人类T细胞：将人类T细胞与磁珠复合物培养活化，得到活化的人类T细胞与磁珠复合物；慢病毒转染：将慢病毒加入活化的人类T细胞与磁珠复合物，进行转染，得到人类CAR‑T细胞与磁珠复合物；移除磁珠：自人类CAR‑T细胞与磁珠复合物移除磁珠，得到人类CAR‑T细胞；人类CAR‑T细胞扩增：将人类CAR‑T细胞扩增培养，即可得富含Tscm的人类CAR‑T细胞。本发明专利技术可于短时间扩增CAR‑T细胞，且生成的人类CAR‑T细胞具有高比例的Tscm的T细胞，更适于CAR‑T细胞疗法。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术是关于一种生产人类嵌合抗原受体t细胞(chimeric antigen receptor tcell，car-t)的方法，尤其是一种生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的car-t细胞的方法。

技术介绍

1、car-t细胞疗法是利用基因编辑技术使t细胞表现能辨识肿瘤细胞表面抗原的受体；当改造的t细胞输回人体之后，能够辨识肿瘤细胞进而毒杀之。

2、然此疗法亦具有副作用，其中最严重的不良反应为细胞激素释放症候群(cytokine release syndrome，crs)，即当car-t细胞对抗肿瘤细胞时会大量释放细胞激素，产生过于激烈的发炎反应、微血管渗漏、凝血连锁反应，更甚者可能导致心脏、肺脏及肾脏衰竭或脑肿胀而危及生命。目前普遍认为，car-t细胞中若富含干细胞样中央记忆表型的t细胞(stem central memory t cell，tscm)，可以增加car-t细胞在人体内存续的时间，增加治疗疗效，并降低细胞激素释放症候群与神经学毒性的发生率及严重度。

3、然而，人体周边血液中tscm细胞比例仅约为1-5％。现有生产本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产富含干细胞样中央记忆表型T细胞的人类嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，包含：

2.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型T细胞的人类嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，所述人类周边血液单核细胞是分离自人类的全血。

3.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型T细胞的人类嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中所述磁珠的数量为所述人类周边血液单核细胞中人类T细胞数量的2至4倍。

4.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型T细胞的人类嵌合抗原受体T细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的人类T细胞与磁珠复...

【技术特征摘要】

1.一种生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的人类嵌合抗原受体t细胞的方法，其特征在于，包含：

2.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的人类嵌合抗原受体t细胞的方法，其特征在于，所述人类周边血液单核细胞是分离自人类的全血。

3.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的人类嵌合抗原受体t细胞的方法，其特征在于，步骤(2)中所述磁珠的数量为所述人类周边血液单核细胞中人类t细胞数量的2至4倍。

4.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的人类嵌合抗原受体t细胞的方法，其特征在于，步骤(3)中所述的人类t细胞与磁珠复合物培养于36.5℃至37.5℃下16小时至20小时。

5.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的人类嵌合抗原受体t细胞的方法，其特征在于，步骤(4)是在36.5℃至37.5℃下进行慢病毒转染40小时至48小时。

6.如权利要求1所述的生产富含干细胞样中央记忆表型t细胞的人类嵌合抗原受体t细胞的方法，其特征在于，步骤(4)的慢病毒转染是将抗cd19、抗cd22、抗b细胞成熟抗原或抗间皮素的受体基因转染至所...

【专利技术属性】
技术研发人员：林建廷，林成龙，赖怡卉，林宣慧，董姿巡，
申请(专利权)人：沛尔生技医药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：