【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、癌症是一种疾病，所述疾病的特征为异常细胞不受控制地分裂且具有浸润和破坏受试者的正常组织和/或器官的能力。癌症是全球第二大死因，在2018年造成估计960万人死亡，其中最常见的癌症包括肺癌(约209万例)、乳癌(约209万例)、结肠癌(约180万例)、前列腺癌(约128万例)、皮肤癌(约104万例)，以及胃癌(约103万例)。
2、癌症的疗法可能因癌症的类型及进展程度而异。癌症的常规疗法包括手术、放射疗法以及化学疗法。此类疗法通常会引起各种并发症或副作用，例如感染、血栓、出血、恶心及呕吐、腹泻、神经或肌肉损伤、失禁以及性能力及生育方面的问题。免疫疗法为癌症治疗提供了一种替代策略，其旨在通过例如阻断免疫检查点或增强免疫细胞(例如t细胞或b细胞)靶向癌细胞及破坏癌细胞的能力来特异性刺激受试者对癌细胞的免疫反应。已有报道指出在癌症患者体内产生与免疫治疗药物过度刺激或非特异性毒性相关的严重不良反应，包括神经毒性、细胞激素释放综合征(cytokine release syndrome，crs)、过敏、器官发炎，以及自体免疫性疾病。
3、因此，研发出专门靶向癌细胞而不影响正常细胞和/或组织的有效癌症疗法是极其重要的。
技术实现思路
1、本公开至少部分地基于研发用于快速且有效地生产经双特异性抗体武装的免疫细胞(例如t细胞)的方法，所述双特异性抗体包含至少一个针对肿瘤相关抗原的结合部分体。本文公开的方法允许在短时间内(例如少于6小时)生产武装免疫细胞，其可富含
2、据此，在某些方面，本公开的特征是一种制备武装免疫细胞的方法，包括：(i)从人类血液样本中分离出cd3+免疫细胞群；以及(ii)将所述免疫细胞群与对cd3和肿瘤相关抗原(taa)具有特异性的双特异性抗体接触以产生武装免疫细胞，所述武装免疫细胞在细胞表面上呈现所述双特异性抗体。在某些情况下，步骤(i)与步骤(ii)可同时进行。在某些情况下，所述cd3+免疫细胞群在进行步骤(ii)之前没有在体外培养。
3、在某些实施例中，所述cd3+免疫细胞群包括cd8+t细胞、cd4+t细胞、自然杀伤(nk)t细胞、调节性t(treg)细胞，或其组合。在某些实例中，所述cd3+免疫细胞群基本上是cd8+t细胞，例如，包含至少80％的cd8+t细胞。在其它实例中，所述cd3+免疫细胞群基本上是cd4+t细胞，例如，包含至少80％的cd4+t细胞。在另外的其它实例中，所述cd3+免疫细胞群基本上是nk t细胞，例如，包含至少80％的nk t细胞。在其它实例中，所述cd3+免疫细胞群基本上是treg细胞，例如，包含至少80％的treg细胞。
4、在某些实施例中，所述人类血液样本是周边血单核细胞(pbmc)样本。例如，所述人类血液样本可获自人类捐赠者。在特定实例中，所述人类血液样本可获自人类癌症患者。
5、在本文公开的任何方法中，步骤(i)可包括负向选择。或者，步骤(i)包括正向选择。或者或此外，步骤(ii)可包括将所述免疫细胞群与所述双特异性抗体在约4-37℃的温度下培育约30分钟至2小时。
6、在某些实施例中，本文公开的方法可进一步包括将所述武装免疫细胞施用于有此需要的人类患者。在某些情况下，所述武装免疫细胞是人类患者的自体细胞。在其它实施例中，本文公开的方法可进一步包括将所述武装免疫细胞置于冷冻保存溶液中储存。
7、在本文公开的任何方法中，所述双特异性抗体可包含结合人类cd3的第一抗原结合片段，其包含具有第一重链可变区(vh)的第一重链以及具有第一轻链可变区(vl)的第一轻链。相对于第一参考抗体，所述第一vh可包含相同的重链互补决定区(cdr)或不超过5个氨基酸变异，且相对于所述参考抗体，所述第一vl包含相同的轻链cdr或不超过5个氨基酸变异，所述参考抗体可以是cta.02、cta.03、cta.04，或cta.05。在某些实例中，所述第一重链及所述第一轻链包含与所述参考抗体相同的vh及vl。
8、在某些实施例中，所述双特异性抗体包含结合所述taa的第二抗原结合片段。示例性的taa包括但不限于cd20、cd19、egfr、her2、psma、cea、epcam、fap、pd-l1、cd38、cd33、cmet、cd47、trail-r2、间皮素，或gd2。
9、在其它方面，本公开提供一种治疗癌症的方法，包括将获自本文公开的任何制备方法的武装免疫细胞群施用于人类癌症患者。在某些情况下，所述人类癌症患者包含双特异性抗体所结合的表达taa的癌细胞。在某些实例中，所述群武装免疫细胞是所述人类患者的自体细胞。在其它情况下，所述武装免疫细胞群是人类患者同种异体的细胞。
10、在某些实施例中，所述人类癌症患者可能患有黑色素瘤、食道癌、胃癌、脑肿瘤、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、膀胱癌、乳癌、胰脏癌、结肠癌、直肠癌、结肠直肠癌、肾癌、肝细胞癌、卵巢癌、前列腺癌、甲状腺癌、睾丸癌、头颈部鳞状细胞癌、白血病、淋巴瘤，或骨髓瘤。
11、本文还提供武装免疫细胞(例如通过本文公开的任何方法制备的武装t细胞)用于癌症治疗以及此类武装免疫细胞在制造用于癌症治疗的药物中的用途。
12、本公开的一或多个实施例的细节阐述于以下描述中。从以下附图与数个实施例的详细描述，以及从所附权利要求书，本公开的其它特征或优点将变得显而易见。
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1.一种制备武装免疫细胞的方法，包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述CD3+免疫细胞群包括CD8+T细胞、CD4+T细胞、自然杀伤(NK)T细胞、调节性T(Treg)细胞，或其组合。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述CD3+免疫细胞群基本上是CD8+T细胞。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述CD3+免疫细胞群基本上是CD4+T细胞。
5.根据权利要求2所述的方法，其中所述CD3+免疫细胞群基本上是NK T细胞。
6.根据权利要求2所述的方法，其中所述CD3+免疫细胞群基本上是Treg细胞。
7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的方法，其中所述人类血液样本是周边血单核细胞(PBMC)样本。
8.根据权利要求1至7中任一权利要求所述的方法，其中所述人类血液样本获自人类捐赠者。
9.根据权利要求1至8中任一权利要求所述的方法，其中所述人类血液样本获自人类癌症患者。
10.根据权利要求1至9中任一权利要求所述的方法，其中步骤(i)包括负向选择。
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