【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及分子信标探针组合及应用。
技术介绍
1、分子诊断技术是目前发展最快的ivd细分赛道之一，基于荧光定量技术的分子诊断产品的开发在我国市场中用于进行基因检测的技术主要分为pcr技术、基因芯片技术、fish技术和基因测序技术四种，不同技术分类有着不同的应用场景。
2、水解探针，也叫taqman探针，是最常用的探针类型之一。水解探针包括一段序列特异性的寡核苷酸(15-25nt)，一端是荧光基团，另一端是淬灭基团。当探针完整时，淬灭基团会抑制荧光信号。在目标扩增过程中，一些聚合酶的5'到3'外切酶活性会裂解探针，因此荧光基团不再靠近淬灭基团，从而产生荧光信号。
3、qiagen公司的snp和lgc公司的kasp技术通过竞争性pcr对通用荧光探针进行检测，通用荧光探针含有一条荧光探针5’端修饰荧光基团，一条淬灭探针与荧光探针互补，3’端有淬灭基团。在检测体系中引入与通用荧光探针互补的序列，当目标产物积累后，荧光探针作为引物进行扩增，体系的荧光强度随着产物的积累增强，进而达到目标产物检测的目的。
4、探针由于进行了特殊的标记修饰，价格相对普通非修饰引物高出很多。普通的taqman探针背景荧光噪音高，且受序列长度限制，在设计时会有一定的难度；经mgb修饰的taqman探针能够显著提高tm，减少序列长度，降低了本底信号，但是价格也显著升高；且taqman探针是针对靶标进行设计，不具备通用性。qiagen公司的snp和lgc公司的kasp技术改变了体系设计策略，通用型探针虽然成本上有一
5、因此，提供一种背景荧光噪音低、能够实现单管进行超多重检测的分子信标探针具有重要的意义。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了分子信标探针组合及应用。
2、本专利技术提供了分子信标探针组合及应用。本专利技术改良版分子信标探针检测体系，体系背景荧光噪音低，使用具有通用性，经过试验验证，改良版的分子信标基因分型结果准确、检测限低至1000拷贝。
3、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
4、本专利技术提供了分子信标探针组合，包括mb探针和tp探针；
5、所述mb探针的5’端存在5～7个碱基与3’端序列反向互补配对；
6、所述tp探针包括与mb探针反向互补的寡核苷酸序列和与靶序列反向互补配对的寡核苷酸序列；
7、所述tp探针的5’端包括与mb探针反向互补的寡核苷酸序列；所述tp探针的3’端封闭修饰；所述修饰包括但不限于磷酸化和氨基化。
8、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述mb探针包括mb1、mb2、mb3、mb4、mb5或mb6中的一个或多个：
9、所述mb1、mb2、mb3、mb4、mb5或mb6依次具有：
10、(ⅰ)、如seq id no.1、2、3、4、5或6所示的核苷酸序列；或
11、(ⅱ)、与(ⅰ)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(ⅰ)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
12、(ⅲ)、与(ⅰ)或(ⅱ)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(ⅰ)或(ⅱ)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
13、(ⅳ)、与(ⅰ)～(ⅲ)任一项所述核苷酸序列具有至少80％序列同源性的核苷酸序列。
14、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述mb探针的5’端带有不同的荧光基团，3’端带有淬灭基团；
15、所述荧光基团包括fam、vic、rox和/或cy5；
16、所述淬灭基团包括bhq1、bhq2和/或tamara。
17、本专利技术还提供了所述分子信标探针组合在碱基突变检测中的应用。
18、在本专利技术的一些具体实施方案中，碱基突变包括单碱基突变。
19、在上述研究的基础上，本专利技术还提供了所述分子信标探针组合在序列特异性检测中的应用。
20、本专利技术还提供了试剂盒，包括所述分子信标探针组合。
21、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述试剂盒还包括5’-3’外切活性的聚合酶和通用引物。
22、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述通用引物用于目标序列的扩增。
23、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述通用引物、所述分子信标探针组合的tp探针和所述分子信标探针组合的mb探针的浓度比包括10:5:1；所述5’-3’外切活性的聚合酶的酶活包括1.25u～2u。
24、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述分子信标探针组合的mb探针的浓度为10μm/μl；所述分子信标探针组合的tp探针的浓度为10μm/μl；所述5’-3’外切活性的聚合酶的浓度为5u/μl；所述通用引物的浓度为10μm/μl。
25、本专利技术还提供了碱基突变的检测方法，基于如下任意项对样品进行检测：
26、(1)、所述分子信标探针组合；和/或
27、(2)、所述试剂盒。
28、在本专利技术的一些具体实施方案中，碱基突变包括单碱基突变。
29、在本专利技术的一些具体实施方案中，所述分子信标探针组合的tp序列的设计遵循以下原则：(1)mb-p序列+snp位点处的碱基与mb序列反向互补；(2)靶向特异性序列起始点是snp位点；(3)靶向特异性序列的tm值高于普通引物5-10℃；(4)多重体系中，同一个mb探针上的多个mb-p的δtm≥5℃。
30、在本专利技术的一些具体实施方案中，碱基突变的检测方法采用的mb探针包括mb1、mb3和mb6：
31、所述mb1、mb3和mb6依次具有：
32、(a)、如seq id no.1、3和6所示的核苷酸序列；或
33、(b)、与(a)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与(a)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或
34、(c)、与(a)或(b)所示的核苷酸序列经取代、缺失或添加一个或多个核苷酸序列获得的核苷酸序列，且与(a)或(b)所示的核苷酸序列功能相同或相似的核苷酸序列；或
35、(d)、与(a)～(c)任一项所述核苷酸序列具有至少80％序列同源性的核苷酸序列。
36、在本专利技术的一些具体实施方案中，碱基突变的检测方法采用的tp探针包括va1-wt2、va1-mt3、vd2-wt2、vd2-mt2、gi2-wt2和gi2-mt3；
37、所述va1-wt2、va1-mt3、vd2-wt2、vd2-mt2、gi2-wt2和gi2-mt3依次具有：
38、a)、如seq id no.36、37、40、41、44和45所示的核苷酸序列；或
39、b)、与a)所示的核苷酸序列编码相同蛋白质，但因遗传密码的简并性而与a)所示的核苷酸序列不同的核苷酸序列；或...
【技术保护点】
1.分子信标探针组合，其特征在于，包括MB探针和TP探针；
2.如权利要求1所述的分子信标探针组合，其特征在于，所述MB探针包括MB1、MB2、MB3、MB4、MB5或MB6中的一个或多个：
3.如权利要求1或2所述的分子信标探针组合，其特征在于，所述MB探针的5’端带有不同的荧光基团，3’端带有淬灭基团；
4.如权利要求1至3任一项所述的分子信标探针组合在碱基突变检测中的应用。
5.如权利要求1至3任一项所述的分子信标探针组合在序列特异性检测中的应用。
6.试剂盒，其特征在于，包括如权利要求1至3任一项所述的分子信标探针组合。
7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，还包括5’-3’外切活性的聚合酶和通用引物。
8.如权利要求6或7所述的试剂盒，其特征在于，所述通用引物、所述分子信标探针组合的TP探针和所述分子信标探针组合的MB探针的浓度比包括10:5:1；所述5’-3’外切活性的聚合酶的酶活包括1.25U～2U。
9.碱基突变的检测方法，其特征在于，基于如下任意项对样品进行检测：
10.序列特异性的检测方法，其特征在于，基于如下任意项对样品进行检测：
...【技术特征摘要】
1.分子信标探针组合，其特征在于，包括mb探针和tp探针；
2.如权利要求1所述的分子信标探针组合，其特征在于，所述mb探针包括mb1、mb2、mb3、mb4、mb5或mb6中的一个或多个：
3.如权利要求1或2所述的分子信标探针组合，其特征在于，所述mb探针的5’端带有不同的荧光基团，3’端带有淬灭基团；
4.如权利要求1至3任一项所述的分子信标探针组合在碱基突变检测中的应用。
5.如权利要求1至3任一项所述的分子信标探针组合在序列特异性检测中的应用。
6.试剂盒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄精彩，陈茜，杨漫漫，王然，袁明，陈练佳，
申请(专利权)人：深圳零一生命科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。