【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，涉及一种用于脊髓损伤修复的sirna及其应用。
技术介绍
1、脊髓损伤(sci)是一种破坏性的神经系统状态，脊髓损伤主要分为原发性损伤和继发性损伤两个阶段；原发性损伤为脊髓受到的直接的外力作用导致的机械创伤，导致出血，神经及轴突网络的破坏；继发性损伤大致分为三个阶段，急性期、亚急性期、慢性期。
2、在针对脊髓损伤的各种治疗中，其最终目的都是促神经发生。由于移植外源干细胞伴随着免疫原性等问题，内源神经干细胞成为脊髓损伤修复的有望靶点。目前促内源性神经干细胞增殖的研究中，包括物理的电刺激疗法，小分子化合药物以及神经营养因子等蛋白类药物干预法，如microrna(mirna)等，mirna是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链rna分子，大多数mirna基因以单拷贝、多拷贝或基因簇的形式存在于基因组中，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。单链mirna序列被掺入rna沉默复合物中，然后与mrna序列结合，通过降解或阻断靶向mrna中的翻译来执行负调节作用。目前已经发现很多与神经干细胞增殖相关的mirna，如cn113662956a公开了小rnamir-30a-5p在修复脊髓损伤方面的应用，但并未确切地明确其靶点，或者mirna并非对应单一靶点，故而未能阐明其清楚地作用机制。
3、目前关于促神经发生的研究中，小分子化合药物和蛋白类因子受到广泛关注，但他们也有不可避免的缺陷，天然小分子化合药物在发挥疗效的同时会有一定的副作用产生；蛋白类药物如神经营养因子、生长因子、由于其制
4、综上所述，开发安全、有效的促神经发生的药物对于脊髓损伤的治疗具有重要意义。
技术实现思路
1、针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供降低细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂的表达量的试剂在制备脊髓损伤修复的药物中的应用，设计高安全性、特异性且能够针对神经干细胞增殖和分化的sirna体系，以期有效进行脊髓损伤的治疗。
2、为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供降低细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂的表达量的试剂在制备用于脊髓损伤修复的药物中的应用，所述细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂包括p21蛋白、p27蛋白、p19蛋白、p15蛋白或p16蛋白中任意一种，所述试剂包括以细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂为靶标制备或筛选得到的使细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂低表达或不表达的试剂。
4、本专利技术中，发现通过下调周期蛋白激酶抑制剂蛋白(p21蛋白、p27蛋白、p19蛋白、p15蛋白或p16蛋白等)的表达来调控细胞周期从而激活休眠的成体干细胞，机制清楚，更具针对性。
5、可以理解，本专利技术所述降低细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂的表达量的试剂为本领域公知的能够使蛋白表达下调的试剂，本领域技术人员能够知晓并获取。
6、优选地，所述试剂包括核酸分子、核酸构建体、慢病毒、抗体或小分子化合物中任意一种。
7、优选地，所述核酸分子包括sirna和/或sgrna。
8、优选地，所述sirna的核酸序列包括seq id no.1-seq id no.4所示序列中任意一种。
9、第二方面，本专利技术提供一种用于脊髓损伤修复的sirna，所述sirna的核酸序列包括seq id no.1-seq id no.8所示序列。
10、本专利技术中，设计特定的sirna通过下调周期蛋白激酶抑制剂蛋白的表达来调控细胞周期从而激活休眠的成体干细胞，机制清楚，更具针对性，能够有效促进干细胞的增殖及分化，促神经发生，从而应用于脊髓损伤恢复。
11、本专利技术中，所述sirna包括正义链(sense)和反义链(antisense)，所述正义链和所述反义链形成rna双链，本专利技术共设计4条sirna，sirna-1(正义链包括seq id no.1，反义链包括seq id no.2)、sirna-2(正义链包括seq id no.3，反义链包括seq id no.4)、sirna-3(正义链包括seq id no.5，反义链包括seq id no.6)和sirna-4(正义链包括seq id no.7，反义链包括seq id no.8)。
12、seq id no.1：gcaaaguaugccgucgucutt。
13、seq id no.2：agacgacggcauacuuugctt。
14、seq id no.3：aacuacgucugggagcgugtt。
15、seq id no.4：cacgcucccagacguaguugc。
16、seq id no.5：gcagaccagccuaacagautt。
17、seq id no.6：aucuguuaggcuggucugctt。
18、seq id no.7：ggucuucugcaagagaaagtt。
19、seq id no.8：cuuucucuugcagaagacctt。
20、本专利技术中，设计特定的sirna，sirna安全性高、特异性好，在体内可被降解为无害的核苷酸分子，能够精确地靶向p21蛋白而不引起其他基因表达的紊乱。
21、第三方面，本专利技术提供第二方面所述的用于脊髓损伤修复的sirna在制备脊髓损伤修复的制剂中的应用。
22、第四方面，本专利技术提供一种sirna递送系统，所述sirna递送系统包括第二方面所述的用于脊髓损伤修复的sirna和递送载体，所述递送载体包覆所述sirna，所述递送载体包括正电高分子材料和/或脂质体。
23、优选地，所述sirna递送系统中sirna和递送载体的氮/磷(n/p)比(5～10):1，包括但不限于6:1、7:1、8:1或9:1。
24、优选地，所述正电高分子材料包括聚乙烯亚胺(pei)、聚氨基酯或聚乳酸-羟基乙酸共聚物中任意一种或至少两种的组合。
25、可以理解，本专利技术所述脂质体为本领域公知的用于体内药物递送的脂质体，本领域技术人员能够直接购买或根据现有技术中方法进行制备。
26、优选地，所述脂质体包括阳离子脂质体。
27、本专利技术利用阳离子脂质体，在高效包载sirna的同时相对于其他载体如高分子材料具有更低的毒性。
28、优选地，所述阳离子脂质体含有(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵、二油酰基磷脂酰乙醇胺和二油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000。
29、优选地，所述脂质体中(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵、二油酰基磷脂酰乙醇胺和二油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000的质量比为1:1:(1～3)，包括但不限于1:1:1.2、1:1:1.5、1:1:1.6、1:1:1.8、1:1:2、1:1:2.2、1:1:2.5或1:1:2.8。
30、优选地，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.降低细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂的表达量的试剂在制备用于脊髓损伤修复的药物中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括核酸分子、核酸构建体、慢病毒、抗体或小分子化合物中任意一种；
3.一种用于脊髓损伤修复的siRNA，其特征在于，所述siRNA的核酸序列包括SEQ IDNO.1-SEQ ID NO.8所示序列中任意一种。
4.权利要求3所述的用于脊髓损伤修复的siRNA在制备脊髓损伤修复的制剂中的应用。
5.一种siRNA递送系统，其特征在于，所述siRNA递送系统包括权利要求3所述的用于脊髓损伤修复的siRNA和递送载体，所述递送载体包覆所述siRNA；
6.根据权利要求5所述的siRNA递送系统，其特征在于，所述siRNA递送系统中siRNA和递送载体的N/P比(5～10):1；
7.根据权利要求6所述的siRNA递送系统，其特征在于，所述阳离子脂质体含有(2,3-二油酰基-丙基)-三甲基氯化铵、二油酰基磷脂酰乙醇胺和二油酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000；
8.权利
9.一种用于脊髓损伤修复的水凝胶体系，其特征在于，所述水凝胶体系包括权利要求3-7任一项所述的siRNA递送系统和水凝胶，所述siRNA递送系统负载于所述水凝胶中。
10.根据权利要求9所述的用于脊髓损伤修复的水凝胶体系，其特征在于，所述水凝胶体系中所述siRNA的浓度为1～5nM/20g(施用目标体重)。
...【技术特征摘要】
1.降低细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂的表达量的试剂在制备用于脊髓损伤修复的药物中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括核酸分子、核酸构建体、慢病毒、抗体或小分子化合物中任意一种；
3.一种用于脊髓损伤修复的sirna，其特征在于，所述sirna的核酸序列包括seq idno.1-seq id no.8所示序列中任意一种。
4.权利要求3所述的用于脊髓损伤修复的sirna在制备脊髓损伤修复的制剂中的应用。
5.一种sirna递送系统，其特征在于，所述sirna递送系统包括权利要求3所述的用于脊髓损伤修复的sirna和递送载体，所述递送载体包覆所述sirna；
6.根据权利要求5所述的sirna递送系统，其特征在于，...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴建武，肖小芳，陈艳艳，
申请(专利权)人：中国科学院苏州纳米技术与纳米仿生研究所，
类型：发明
国别省市：
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