【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，具体为一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒。
技术介绍
1、微量白蛋白尿是指在尿中出现微量白蛋白。白蛋白是一种血液中的正常蛋白质，人体代谢正常情况下，尿中的白蛋白极少，具体到每升尿白蛋白不超过30mg(<30mg/l)，所以叫微量白蛋白。如果在体检后发现尿中的微量白蛋白在30mg/l-200mg/l范围内，就属于微量白蛋白尿，如果患者能够经过规范的修复肾单位，逆转纤维化治疗，尚可彻底修复肾小球，消除蛋白尿，微量白蛋白尿也是整个血管系统改变的征象，并可认为是动脉病变的“窗口”，因为它是肾脏和心血管系统改变的早期指征。临床中，通常应用尿微量蛋白指标来监测肾病的发生。尿微量蛋白的检测是早期发现肾病最敏感、最可靠的诊断指标。通过尿微量白蛋白的数值，结合发病情况、症状以及病史陈述就可以较为准确的诊断病情。判断病情进入了纤维化那个阶段。因此尿微量白蛋白测定试剂盒在临床应用上非常有意义。
2、慢性肾病(ckd)发病率高、起病隐秘、后果严重，已成为全球性公共健康问题。中国的慢性肾病患者约有1.195亿，总患病率为10.8％。终末期肾病(esrd)患者数量约200万人。目前，各个级别的医院都广泛开展尿微量白蛋白的检测，一些大医院每天的临床样本经常有上百例；
3、同时鉴于肾病病情的不同，正常人的尿微量白蛋白一般小于等于30mg/l，但是严重的肾病病人尿液中尿微量白蛋白的含量可能达到g/l甚至几十g/l，目前市场上大多数的尿微量试剂，线性都在300-400左右，对于超高的样本可能还会出现假阴性的情况。在实际
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，以解决上述
技术介绍
中提出的目前市面上的产品大多数线性在300-400左右，面对大量的肾病患者的高值尿微量白蛋白不能给出准确的测值，需要医院进行二次甚至三次检测，浪费时间和金钱的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，包括r1、r2和校准品，所述校准品包括冻干校准品和液体校准品，所述r2为pbs抗体稀释液，所述r2采用辛酸-硫酸铵盐析抗体纯化，所述抗体原料采用羊血清；
3、所述r1的配方包括：每1000ml溶剂至少包含十二水合磷酸氢二钠4.65g、二水合磷酸二氢钠0.56g、氯化钠9g、纯化水800ml、peg2000040g、表面活性剂2ml和防腐剂5ml；
4、所述冻干校准品的配方包括：每1000ml溶剂至少包含十二水合磷酸氢二钠4.65g、二水合磷酸二氢钠0.56g、氯化钠27g、纯化水800ml、糖类5g、保护蛋白2g和防腐剂5ml；
5、所述液体校准品的配方包括：每1000ml溶剂至少包含十二水合磷酸氢二钠4.65g、二水合磷酸二氢钠0.56g、氯化钠27g、纯化水700ml、糖类20g、蛋白保护剂15g、表面活性剂2ml、蛋白酶抑制剂150ml和防腐剂5ml。
6、本专利技术在一较佳示例中可以进一步配制为：所述辛酸-硫酸铵盐析抗体纯化的方法，包括如下步骤：
7、步骤a1.羊血清1000ml用4000ml醋酸缓冲液稀释，室温下用电磁搅拌器边；
8、步骤a2.搅拌边缓慢滴加辛酸125ml，滴加完后继续搅拌30min；
9、步骤a3.离心(10000rpm，20分钟)，收集上清液，弃去沉淀，上清液用滤纸过滤除去悬浮物，量体积；
10、步骤a4.按照10％体积加入10×pbs，用5mol/lnaoh调ph至7.4；
11、步骤a5.在上一步的溶液中加入总体积×0.818的饱和硫酸铵，室温下用电磁搅拌器边搅拌边缓慢滴加，滴加完后继续搅拌2h，2-8℃静置过夜；
12、步骤a6.离心8000rpm离心20min，沉淀用200ml的1×pbs复溶；
13、步骤a7.1×pbs透析或者脱盐柱去除硫酸铵，获得抗体。
14、本专利技术在一较佳示例中可以进一步配制为：所述pbs抗体稀释液的配制方法，包括如下步骤：
15、步骤b1.取十二水合磷酸氢二钠4.65g，二水合磷酸二氢钠0.56g，氯化钠9g溶于800ml纯化水中，搅拌；
16、步骤b2.加入防腐剂5ml，搅拌；
17、步骤b3.定容至1000ml。
18、本专利技术在一较佳示例中可以进一步配制为：所述r1的配制方法，包括如下步骤：
19、步骤c1.取十二水合磷酸氢二钠4.65g，二水合磷酸二氢钠0.56g，氯化钠9g溶于800ml纯化水中，搅拌；
20、步骤c2.根据配方加入peg2000040g搅拌；
21、步骤c3.加入表面活性剂，2ml搅拌；
22、步骤c4.加入防腐剂5ml，搅拌；
23、步骤c5.定容至1000ml。
24、本专利技术在一较佳示例中可以进一步配制为：所述冻干校准品的配制方法，包括如下步骤：
25、步骤d1.取十二水合磷酸氢二钠4.65g，二水合磷酸二氢钠0.56g，氯化钠27g溶于800ml纯化水中，搅拌；
26、步骤d2.根据配方加入糖类物质5g，搅拌；
27、步骤d3.根据配方分别加入保护蛋白2g，搅拌；
28、步骤d4.加入防腐剂5ml，搅拌；
29、步骤d5.定容至1000ml。
30、本专利技术在一较佳示例中可以进一步配制为：所述液体校准品的配制方法，包括如下步骤：
31、步骤e1.取十二水合磷酸氢二钠4.65g，二水合磷酸二氢钠0.56g，氯化钠27g溶于700ml纯化水中，搅拌；
32、步骤e2.根据配方加入糖类物质20g，搅拌；
33、步骤e3.根据配方分别加入蛋白保护剂15g，搅拌；
34、步骤e4.根据配方分别入表面活性剂2ml，搅拌；
35、步骤e5.根据配方加入蛋白酶抑制剂150ml，搅拌；
36、步骤e6.加入防腐剂5ml，搅拌；
37、步骤e7.定容至1000ml。
38、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
39、该专利技术能够实现线性1500mg/l，并且50g/l的高值能够大于线性1500mg/l，临床上实现了，低值检测准确，减少了临床复检的情况，也大大降低假阴性的情况。
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1.一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，包括R1、R2和校准品，其特征在于：所述校准品包括冻干校准品和液体校准品，所述R2为PBS抗体稀释液，所述R2采用辛酸-硫酸铵盐析抗体纯化，所述抗体原料采用羊血清；
2.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述辛酸-硫酸铵盐析抗体纯化的方法，包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述PBS抗体稀释液的配制方法，包括如下步骤：
4.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述R1的配制方法，包括如下步骤：
5.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述冻干校准品的配制方法，包括如下步骤：
6.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述液体校准品的配制方法，包括如下步骤：
【技术特征摘要】
1.一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，包括r1、r2和校准品，其特征在于：所述校准品包括冻干校准品和液体校准品，所述r2为pbs抗体稀释液，所述r2采用辛酸-硫酸铵盐析抗体纯化，所述抗体原料采用羊血清；
2.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在于：所述辛酸-硫酸铵盐析抗体纯化的方法，包括如下步骤：
3.根据权利要求1所述的一种高性能的尿微量白蛋白测定试剂盒，其特征在...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡冯博，
申请(专利权)人：上海墨肽生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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