提取血浆中游离核酸的方法、试剂盒及其应用技术

本发明专利技术提出了一种提取血浆中游离核酸的方法，包括将经裂解处理后的血浆样品与含有第一磁珠的第一溶液进行孵育，收集第二磁珠；对所述第二磁珠进行有机试剂纯化处理，得到纯化产物；将所述纯化产物与含有第三磁珠的第二溶液进行孵育，收集第四磁珠；将所述第四磁珠进行醇沉纯化处理，得到所述的游离核酸。采用本发明专利技术所述的方法，能够用于从血浆中高效的分离和纯化DNA，并成功回收长度为50nt左右的全新游离DNA片段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物，具体地，本专利技术涉及一种提取血浆中游离核酸的方法，一种试剂盒及其应用，一种建库方法和一种测序方法，更具体地，本专利技术涉及一种结合磁珠法和有机试剂抽提的提取血浆中游离核酸的方法。

技术介绍

1、游离dna(cfdna)可以源自细胞的凋亡、坏死、分泌或主动释放等多种途径。除了肿瘤细胞，正常细胞也会在正常生理状态下释放一定量的游离dna。游离dna作为一种非侵入性的生物标志物，具有广泛的潜在应用价值。游离dna是非随机片段化，分子长短不一，顶点位置在166bp或167bp，包含大量可用于无创产前检测和癌症检测的分子信息。cfdna片段组学包含遗传学以外的信息，例如基因表达推断等。

2、目前新的研究发现，在人类血液中有一类长约50nt的新型游离dna，它在健康人群和癌症患者中存在差异，因此，其有望成为一种新的液体活检和癌症诊断的生物标志物。此类游离dna存在片段短、大部分为单链核酸的特征，用商品化血浆游离核酸提取纯化试剂盒难以回收，因为一般商品化试剂盒的提取产物基本在100bp以上长度的片段，而难以提取得到100bp以下长度的片本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种提取血浆中游离核酸的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一磁珠、所述第三磁珠选自超顺磁性羧基纳米磁珠；

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对所述第二磁珠进行有机试剂纯化处理，得到纯化产物，包括：采用洗脱液洗脱所述第二磁珠，收集洗脱产物；将所述洗脱产物和抽提液混合处理，收集上清液，并将所述上清液作为所述纯化产物；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇沉纯化处理包括：将所述第四磁珠与助沉剂、无水乙醇进行混合处理，将混合处理产物进行孵育处理以及离心处理；

5.根据权利要求1-4...

【技术特征摘要】

1.一种提取血浆中游离核酸的方法，其特征在于，包括：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一磁珠、所述第三磁珠选自超顺磁性羧基纳米磁珠；

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述对所述第二磁珠进行有机试剂纯化处理，得到纯化产物，包括：采用洗脱液洗脱所述第二磁珠，收集洗脱产物；将所述洗脱产物和抽提液混合处理，收集上清液，并将所述上清液作为所述纯化产物；

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述醇沉纯化处理包括：将所述第四磁珠与助沉剂、无水乙醇进行混合处理，将混合处理产物进行孵育处理以及离心处理；

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于，所述裂解处理是在蛋白酶和裂解液存在的条件下进行的；

6.根据权利要求1-4...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘维强，魏凤香，胡亮，裴元元，林娜妮，卢秦，陈燕香，陈姗，张春生，
申请(专利权)人：深圳市龙岗区妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：