【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物，具体涉及一种高效表达重组尿酸酶的大肠杆菌重组菌株及其制备和应用。
技术介绍
1、尿酸(ua)是rna、dna和atp分解过程中产生的含氮废物。大多数哺乳动物的血清尿酸(ua在体内的电离形式)水平很低，因为尿酸酶将ua转化为尿囊素，尿囊素是一种极易溶解的排泄产物，可被尿液自由排出。然而，与大多数哺乳动物不同的是，在人类祖先中，尿酸酶的活性在灵长类动物进化过程中逐渐减弱，并在数百万年前较小的类人猿出现之前完全沉默。缺乏尿酸酶是成年雄性血清尿酸(sua)水平为～6.0mg/dl的主要原因，而大多数哺乳动物的尿酸水平<0.5-1mg/dl。
2、尿酸酶突变使sua水平升高，调节效率降低。当血清尿酸水平高于标准阈值时，组织中的尿酸盐晶体沉积开始发生。高尿酸血症的病理阈值为6.8mg/dl。高尿酸血症是发生痛风的主要危险因素，当sua水平升高时，这种风险呈指数增长。只有少数高尿酸水平的患者会发展为痛风。然而，高尿酸血症与多种慢性疾病有关，包括慢性肾病(ckd)、高血压、心血管疾病(cvd)、中风、糖尿病和代谢综合征。此外，在白血病或淋巴瘤化疗期间，恶性细菌核酸中ua的排泄明显增加，可阻断肾小管，引起高尿酸血症甚至急性肾功能衰竭。目前只有5种fda批准和生产的降尿酸疗法(ult):别嘌呤醇、非布司他、probenecid、rasburicase和pegloticase。这些药物都有局限性，无法广泛使用。lesinurad和sulfinpyrazone是fda批准的ult，但不再在市场上销售。因此，有必
3、密码子优化技术是通过基因工程技术，根据宿主的密码子偏好性调整基因的同义密码子，达到消除稀有密码子的目的，并且优化如mrna二级结构和motif等相关参数，从而提高目标蛋白的翻译效率。当异源基因在宿主中无法有效表达时，可以进行密码子优化，调整同义密码子和相关的调控元件，提高翻译效率。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术旨在利用密码子优化技术，合成了一个密码子优化的c.utiis氧化酶基因，构建了重组表达载体从而得到高效表达重组尿酸酶的大肠杆菌重组菌株。
2、本专利技术的技术方案具体如下：
3、本专利技术第一方面提供了一种高效表达重组尿酸酶的大肠杆菌重组菌株的构建方法，包括以下步骤：
4、s1、将如seq id no.1所示的uox序列插入初始质粒中得到重组质粒；
5、s2、将重组质粒转化至大肠杆菌即得大肠杆菌重组菌株。
6、优选地，在上述构建方法中，步骤s1包括以下过程：
7、s11、扩增如seq id no.1所示的uox序列，引入ncoⅰ和xhoⅰ酶切位点，得到扩增后的uox片段；
8、s12、用ncoⅰ和xhoⅰ分别对初始质粒和步骤s11所得扩增后的uox片段进行双酶切，消化、纯化后，分别得到载体产物和uox片段产物；
9、s13、将载体产物和uox片段产物连接，构建得到重组质粒。
10、优选地，在上述构建方法中，所述初始质粒为pet-28a(+)；在本专利技术一实施例中，将密码子优化后的uox序列(如seq id no.1所示)插入质粒pet-28a(+)的ncoⅰ和xhoⅰ之间。
11、优选地，在上述构建方法中，所述大肠杆菌为大肠杆菌bl21(de3)。
12、优选地，在上述构建方法中，步骤s2采用热激法进行转化。
13、本专利技术第二方面提供了一种高效表达重组尿酸酶的大肠杆菌重组菌株，该菌株经由本专利技术所述构建方法制备而成。
14、本专利技术第三方面提供了本专利技术所述大肠杆菌重组菌株在制备重组尿酸酶中的应用，具体为：
15、将大肠杆菌重组菌株置于发酵培养基中培养，添加诱导剂iptg进行诱导培养，待培养结束后收集菌体，经裂解、纯化得到重组尿酸酶。
16、优选地，在上述应用中，所述诱导培养的条件为37℃、0.5mm iptg诱导4-6h。
17、优选地，在上述应用中，所述纯化为两步纯化，先用ni-nta进行纯化，再用离子交换色析进行纯化。
18、相对于现有技术，本专利技术的有益效果为：本专利技术将密码子优化后的c.utiis氧化酶基因通过重组质粒导入大肠杆菌中，构建得到了重组菌株，其构建方法简便；本专利技术提供的大肠杆菌重组菌株，能高效表达重组尿酸酶，且通过两步纯化即可获得高纯度的重组尿酸酶，大大提高了尿酸酶的产量，并降低了制备成本。
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1.一种高效表达重组尿酸酶的大肠杆菌重组菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S1包括以下过程：
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述初始质粒为pET-28a(+)。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌BL21(DE3)。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤S2采用热激法进行转化。
6.根据权利要求1-5任一项所述构建方法制备的大肠杆菌重组菌株。
7.如权利要求6所述的大肠杆菌重组菌株在制备重组尿酸酶中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将大肠杆菌重组菌株置于发酵培养基中培养，添加诱导剂IPTG进行诱导培养，待培养结束后收集菌体，经裂解、纯化得到重组尿酸酶。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述诱导培养的条件为37℃、0.5mM IPTG诱导4-6h。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述纯化为两步纯化，先用Ni-
...【技术特征摘要】
1.一种高效表达重组尿酸酶的大肠杆菌重组菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s1包括以下过程：
3.根据权利要求1或2所述的构建方法，其特征在于，所述初始质粒为pet-28a(+)。
4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述大肠杆菌为大肠杆菌bl21(de3)。
5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤s2采用热激法进行转化。
6.根据权利要求1-5任一项所述构建方法制备的大肠...
【专利技术属性】
技术研发人员：谢浩，冯一平，郭君慧，李其昌，夏关慧芷，邵梅，潘慧健，孙永琦，
申请(专利权)人：武汉理工大学，
类型：发明
国别省市：
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