一种基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法技术

本发明专利技术属于分析化学技术领域，具体公开了一种基于滚环扩增核酸信号放大(RCA)的荧光偏振分析方法，包括以下步骤：第一步、采用哑铃型H链制备哑铃型环状核酸模板HH：第二步、核酸适配体与引物杂交形成双链适配体/引物；加入0‑100ng/mL的赭曲霉毒素A，进行目标物识别，释放引物；第三步、制备RCA产物；第四步、制备具有FAM荧光信号输出的RCA产物；第五步、向待测样品中加入0‑20ng/mL的赭曲霉毒素A制备标准加标溶液，按照第二步和第三步进行加标回收实验，建立目标物检测的标准曲线，计算荧光偏振差值，计算加标后的回收率。本发明专利技术公开的荧光偏振分析方法可实现环境污染物赭曲霉毒素A的实际分析测定，整个方法灵敏度佳、特异性高、稳定性好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学，尤其涉及一种基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法。

技术介绍

1、滚环扩增(rolling circle amplification,rca)技术是一种通过酶介导的恒温核酸扩增技术，被广泛应用于生物医学、食品安全检测等领域，具有生物稳定性高、容量高和生物相容性佳等优点。rca反应是以环状dna/rna为聚合模板，通过部分与环状模板互补的短引物链，在dna聚合酶和dntps作用下，常温快速扩增出成百上千组与模板互补的重复序列，以此形成长单链dna，即rca能快速高效扩增核酸分子。

2、荧光偏振(fluorescence polarization,fp)检测技术，是通过分析体系中荧光分子的偏振信号变化差异，实现对分子间相互作用的研究以及所选目标物的检测，具有灵敏度高、分析快速、操作简便和易实现高通量测定等多种优势，被用于生化分析和疾病诊断等领域。

3、赭曲霉毒素是由曲霉属和青霉属等真菌产生的次生代谢产物。赭曲霉毒素结构类似物中赭曲霉毒素a(ochratoxin a,ota)性质稳定且毒性最强，会损害生物肾脏本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第三步中，phi29 DNA聚合酶的用量为0.05-0.1U。

3.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第一步中，连接成环的反应时间为15-60min。

4.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第一步中，连接成环的反应体系温度≤37℃。

5.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，...

【技术特征摘要】

1.一种基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第三步中，phi29 dna聚合酶的用量为0.05-0.1u。

3.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第一步中，连接成环的反应时间为15-60min。

4.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第一步中，连接成环的反应体系温度≤37℃。

5.根据权利要求1所述的基于滚环扩增核酸信号放大的荧光偏振分析方法，其特征在于，第三步中，hh的实验浓度10-20nm。

【专利技术属性】
技术研发人员：赵晶瑾，田甜，张怡雯，张亮亮，
申请(专利权)人：广西师范大学，
类型：发明
国别省市：