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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物病害生防,特别涉及一种鼠灰链霉菌gd4-20及其在防治香蕉枯萎病中的应用。
技术介绍
1、由尖孢镰刀菌古巴专化型4号小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense race 4,foc4)引起的香蕉枯萎病是我国香蕉生产上最严重的病害之一。种植抗病品种是防控香蕉枯萎病的主要方法,但目前种植的大多数商业香蕉品种对其敏感。利用拮抗微生物进行的生物防治被认为是香蕉枯萎病防控的有效方法,其具有环境友好和可持续性等优点。近年来,已报道的对香蕉枯萎病菌具有较好抑制作用的真菌主要有短密木霉trichodermabrevicompactum和丛枝菌根真菌,细菌主要有铜绿假单胞菌pseudomonas aeruginosa和贝莱斯芽孢杆菌bacillus velezensis等。
2、放线菌是一类重要的可用于香蕉枯萎病防控的生防菌,属于革兰氏阳性菌。其中,链霉菌是放线菌最大的属之一,可产生铁载体、促进寄主植物生长、对植物没有毒性等特点,具有较好的防病促生作用。卢娟等(2011)从海南温泉中分离了海岸链霉菌streptomyces costaricanus hw1,将其与foc4在土壤中进行共培养,用平板涂布法发现可抑制foc4的生长,但没有具体抑制率的报道。yun等(2022)报道了吸水链霉菌streptomyceshygroscopicus 5-4对foc4菌丝生长抑制率为80%,对香蕉枯萎病的防治效果为71.3%。鼠灰链霉菌s.murinus是一类重要的生防菌,已被发现对多种病原具有抑制作用,
技术实现思路
1、为了克服现有技术的缺点与不足,本专利技术的目的在于提供一种鼠灰链霉菌gd4-20。
2、本专利技术的另一目的在于提供一种基于上述鼠灰链霉菌gd4-20制备得到的生物制剂。
3、本专利技术的再一目的在于提供上述鼠灰链霉菌gd4-20或生物制剂的应用。
4、本专利技术的目的通过下述技术方案实现:
5、一种鼠灰链霉菌gd4-20,名称为鼠灰链霉菌(streptomyces murinus)gd4-20,是从健康香蕉根际土壤中分离获得。
6、所述鼠灰链霉菌(streptomyces murinus)gd4-20的保藏信息:保藏单位:广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc),保藏时间为2023年10月07日,保藏地址:广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所,保藏编号:gdmcc no:63854。
7、所述的鼠灰链霉菌gd4-20在高氏i号固体培养基上菌落表面干燥,边缘不规则,分泌可溶性黄绿色素,有泥腥味。显微观察发现菌丝具有分枝,孢子呈透明卵圆形、短杆状或近球形。
8、其中,高氏i号液体培养基:可溶性淀粉20g/l,kno3 1g/l,mgso4·7h2o0.5g/l,nacl 0.5g/l,k2hpo4·3h2o 0.5g/l,fe2(so4)3 0.01g/l,用ddh2o定容,ph为7.4;固体培养基加入琼脂粉15~20g/l。
9、一种生物制剂,包括上述鼠灰链霉菌gd4-20的发酵液、发酵上清液和孢子悬浮液中的至少一种。
10、进一步的,所述发酵液是由上述鼠灰链霉菌gd4-20经液体发酵制备得到;优选包括如下步骤:将鼠灰链霉菌gd4-20孢子悬浮液加入至高氏ι号液体培养基中培养,即可获得发酵液。
11、优选的,鼠灰链霉菌gd4-20孢子在培养基中的终浓度为1~5×106cfu/ml。
12、优选的,所述的培养为于25~30℃下130~180rpm培养5~7d;更优选为于28℃下150rpm培养7d。
13、进一步的,所述发酵上清液是将所述发酵液离心、过滤制备得到;
14、在一个具体实施方式中,热处理的发酵上清液对foc4的抑制率没有显著变化,也有明显的抑制作用。
15、优选的,所述离心的条件为5000~8000rpm离心10~15min;更优选为6000rpm离心10min。
16、优选的,所述过滤为用0.22μm细菌过滤器过滤。
17、优选的,所述热处理的条件为100℃沸水浴30~60min。
18、进一步的,所述孢子悬浮液是先将鼠灰链霉菌gd4-20接种于na液体培养基中第一次培养,获得培养液;再将培养液涂布于高氏ι号固体培养基平板,第二次培养,加无菌水,过滤,即为孢子悬浮液。
19、其中,na液体培养基:牛肉浸膏5g/l,蛋白胨10g/l,nacl 5g/l,用ddh2o定容,ph为7.4;固体培养基加入琼脂粉15~20g/l。
20、优选的,所述第一次培养的条件为于25~30℃下130~180rpm培养1~3d;更优选为于28℃下150rpm培养2d。
21、优选的,所述第二次培养的条件为25~30℃培养5~7d;更优选为28℃培养7d。
22、优选的,所述过滤为用100~300目细胞筛过滤;更优选为用200目细胞筛过滤。
23、上述鼠灰链霉菌gd4-20或生物制剂的应用,为如下应用中的一种或多种组合:
24、(1)在防治香蕉枯萎病中的应用;
25、(2)在制备防治香蕉枯萎病的制剂中的应用;
26、(3)在致畸香蕉枯萎病菌菌丝中的应用;
27、(4)在抑制番茄叶霉病菌(fulvia fulva)、香蕉炭疽病菌(colletotrichummusae)、香蕉枯萎病菌4号小种(fusarium oxysporum f.sp.cubenserace 4,foc4)、香蕉枯萎病菌1号小种(fusarium oxysporum f.sp.cubense race 1,foc1)、黄瓜靶斑病菌(corynespora cassiicola)、辣椒炭疽病菌(colletotrichumscovillei)、冬瓜枯萎病菌(fusarium oxysporum f.sp.benincasae)、苦瓜枯萎病菌(fusarium oxysporum f.sp.momordicae)、水稻纹枯病菌(rhizoctonia solani)和番茄枯萎病菌(fusarium oxysporum f.sp.lycopersici)中至少一种生长中的应用;
28、(5)在制备番茄叶霉病菌(fulvia fulva)、香蕉炭疽病菌(colletotrichummusae)、香蕉枯萎病菌4号小种(fusarium oxysporum f.sp.cubenserace 4,foc4)、香蕉枯萎病菌1号小种(fusarium oxysporum f本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鼠灰链霉菌GD4-20,其特征在于:名称为鼠灰链霉菌(Streptomyces murinus)GD4-20,于2023年10月07日保藏于广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号:GDMCC No:63854。
2.一种生物制剂,其特征在于:所述生物制剂包括权利要求1所述的鼠灰链霉菌GD4-20的发酵液、发酵上清液和孢子悬浮液中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的生物制剂,其特征在于:
4.根据权利要求3所述的生物制剂,其特征在于:包括如下步骤:将鼠灰链霉菌GD4-20孢子悬浮液加入至高氏Ι号液体培养基中培养,即获得发酵液。
5.根据权利要求4所述的生物制剂,其特征在于:
6.根据权利要求2所述的生物制剂,其特征在于:
7.根据权利要求2所述的生物制剂,其特征在于:
8.根据权利要求7所述的生物制剂,其特征在于:
9.权利要求1所述的鼠灰链霉菌GD4-20或权利要求2~8任一项所述的生物制剂的应用,其特征在于:
10.根据权利要求9所述的应用,其特征在于:
...【技术特征摘要】
1.一种鼠灰链霉菌gd4-20,其特征在于:名称为鼠灰链霉菌(streptomyces murinus)gd4-20,于2023年10月07日保藏于广东省广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省科学院微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号:gdmcc no:63854。
2.一种生物制剂,其特征在于:所述生物制剂包括权利要求1所述的鼠灰链霉菌gd4-20的发酵液、发酵上清液和孢子悬浮液中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的生物制剂,其特征在于:
4.根据权利要求3所述的生物制剂,其特征...
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