【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种编码asfv蛋白mgf 505-3r的基因及其应用，属于具有抑炎效应的蛋白及其设计与应用领域。
技术介绍
1、非洲猪瘟是一种具有很强传染性的疫病，在世界范围内均有流行。在传入我国后，也对我国的养殖业造成了巨大的经济损失。其具有强大而复杂的免疫逃逸能力，正是依靠其免疫抑制能力，非洲猪瘟病毒能迅速在宿主体内大量增殖，从而导致宿主的迅速死亡。
2、天然免疫是宿主识别和抵抗病毒感染的第一道防线。天然免疫反应的诱导具有快速、非特异性、普遍性和多样性的特点。模式识别受体(pattern recognition receptor，prrs)是天然免疫系统的重要组成部分，识别病原体的核酸、蛋白质、糖和脂类等入侵因子。prrs识别病原体相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns，pamps)，激活信号转导通路，以诱导天然免疫反应，如i型干扰素(interferon，ifn)或nf-κb的产生。
3、nf-κb通路是典型的促炎信号通路，其激活对防御病原微生物的侵袭尤为重要，在宿主天然免疫反应中发挥重要作用。然而，免疫反应过强会导致炎性反应，进而对机体造成损伤。持续的toll样受体(tlr)激活与持续的炎症细胞因子产生和组织损伤有关。然而，由于临床疗效和潜在毒性的限制，很多炎性疾病相关药物的效果受到限制，给患者和整个社会造成了严重的医疗和经济负担。
4、asfv通过自身蛋白采用多种免疫逃逸机制以确保病毒的繁殖与扩散，其抑制tlrs-nf-κb信号通路
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种编码asfv蛋白mgf 505-3r的基因及其应用，所述asfv蛋白mgf 505-3r不损害宿主的防御能力。
2、技术方案：为解决上述技术问题，本专利技术提供一种编码asfv蛋白mgf 505-3r的基因，其核苷酸序列如seq id no.2所示。
3、其中，asfv蛋白mgf 505-3r的氨基酸序列如seq id no.1所示。
4、本专利技术还提供了一种重组质粒、表达盒或重组细胞，其含有所述基因。
5、本专利技术还提供了一种构建所述重组质粒的方法，包括以下步骤：
6、(1)以所述基因为模板，进行pcr扩增，琼脂糖凝胶电泳回收，得到mgf 505-3r产物；
7、(2)将步骤(1)所述mgf 505-3r产物和pcmv载体进行双酶切，使用c115 dna连接酶连接，转化至大肠杆菌dh5α，筛选后得到重组质粒pcmv-mgf 505-3r。
8、其中，所述pcr扩增的引物对的序列如seq id no.3和seq id no.4所示。
9、构建重组细胞过程中的宿主细胞可以是原核细胞，如细菌细胞；或是低等真核细胞，如酵母细胞；或是高等真核细胞，如哺乳动物细胞。代表性例子有：大肠杆菌、链霉菌属、鼠伤寒沙门菌的细菌细胞；真菌细胞如酵母；植物细胞；果蝇s2或sf9的昆虫细胞；cho、cos、293细胞或bowes黑素瘤细胞的动物细胞等。
10、其中，宿主细胞为hek293t和hela细胞。
11、本专利技术还提供了所述asfv蛋白mgf 505-3r、基因或重组质粒、表达盒或重组细胞在制备抗炎药物中的应用。
12、其中，所述抗炎是指干扰tlr信号通路并抑制炎性细胞因子分泌。
13、其中，所述炎性细胞因子包括il-4、il-8、ifn-γ或tnf-α中的一种或几种。
14、其中，所述药物还包括药学上可接受的载体或赋形剂。
15、治疗惰性的无机或有机的载体或赋形剂包括(但不限于)乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、植物油、蜡、脂肪、多羟基化合物例如聚乙二醇、水、蔗糖、乙醇、甘油，诸如此类，各种防腐剂、润滑剂、分散剂、矫味剂。保湿剂、抗氧化剂、甜味剂、着色剂、稳定剂、盐、缓冲液诸如此类也可加入其中，这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。
16、其中，所述抗炎药物的抗炎活性成分含有所述asfv蛋白mgf 505-3r。
17、本专利技术还提供了所述蛋白mgf 505-3r在制备抑制转录因子蛋白活化的药物中的应用。
18、其中，所述转录因子蛋白经不同激动剂诱导，所述激动剂包括pam3csk4、poly(i:c)或lps中的一种或几种。
19、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：1、mgf 505-3r作为一种小分子蛋白，不会产生过度的免疫排斥反应；2、mgf 505-3r对tlr信号通路的干扰作用存在剂量依赖关系，通过降低作用浓度使其产生适度的抑制，但却不损害宿主的防御能力，以避免过度抑炎反应造成的副作用；3、mgf 505-3r与临床所应用的抗炎症因子抗体不同，它们针对的不是单一一种致炎因子，而是多种因子、多条途径，利于损伤组织的修复。
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1.一种编码ASFV蛋白MGF 505-3R的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述ASFV蛋白MGF 505-3R的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
3.一种重组质粒、表达盒或重组细胞，其特征在于，含有权利要求1所述的基因。
4.一种构建权利要求3所述重组质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增的引物对的序列如SEQ IDNO.3和SEQ ID NO.4所示。
6.权利要求1所述基因、权利要求3所述重组质粒、表达盒或重组细胞或ASFV蛋白MGF505-3R在制备抗炎药物中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抗炎为干扰TLR信号通路并抑制炎性细胞因子分泌。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述炎性细胞因子包括IL-4、IL-8、IFN-γ或TNF-α中的一种或几种。
9.权利要求1所述基因、权利要求3所述重组质粒、表达盒或重
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述转录因子蛋白经不同激动剂诱导，所述激动剂包括Pam3CSK4、Poly(I:C)或LPS中的一种或几种。
...【技术特征摘要】
1.一种编码asfv蛋白mgf 505-3r的基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.2所示。
2.根据权利要求1所述的基因，其特征在于，所述asfv蛋白mgf 505-3r的氨基酸序列如seq id no.1所示。
3.一种重组质粒、表达盒或重组细胞，其特征在于，含有权利要求1所述的基因。
4.一种构建权利要求3所述重组质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述pcr扩增的引物对的序列如seq idno.3和seq id no.4所示。
6.权利要求1所述基因、权利要求3所述重组质粒、表达盒或重组...
【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，潘志明，刘弘知，熊丹，康喜龙，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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