【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物学和肿瘤学领域，涉及一种人慢性粒细胞白血病细胞株及其构建方法和应用。
技术介绍
1、慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia，cml)是白血病的一种，表现为外周血或骨髓中、晚幼粒细胞过度增生，抑制骨髓正常的造血系统，呈慢性病程，临床上常伴有肝、脾肿大。cml约占成人白血病15％，在我国的发病率约为0.36/10万。在病程上，cml分为慢性期、加速期及急变期，如果慢性期未治疗，疾病进一步进展会发展到加速期或急变期，进一步转变为急性白血病。慢性粒细胞白血病具有特征性的费城染色体，并产生特异性的bcr-abl融合基因，靶向bcr-abl的络氨酸激酶抑制剂在cml的应用，使cml的10年总体生存率达90％以上，cml也是极少数作为慢性病管理的恶性肿瘤。
2、cml在络氨酸激酶抑制剂靶向治疗下，一般预后良好，但是一旦cml进入加速期或急变期，预后极差，总体生存期不足1年。但是目前cml如何由慢性期进展到加速期及急变期的机制并不清楚。在规范应用络氨酸激酶抑制剂的cml患者自然病程长，大部分患者可以达到长期生存。因此从单一患者的慢性期、加速期、急变期来研究cml进展的机制十分困难。构建不同时期的cml细胞株，对cml疾病进展的机制研究及药物研发具有重要意义。k562细胞株是1976年由慢性粒细胞白血病急变期病人白血病细胞建立来的cml细胞株，也是血液肿瘤建立起来的国际上第二株细胞株，目前广泛应用于cml的发病机制、靶向药物、动物模型的研究。k562细胞株bcr-abl融合基因阳性，对于络
3、染色体核型异常在肿瘤的发生发展及耐药中发挥着重要的作用。其中t(6,11)易位被认为是肿瘤相关性克隆，其中已经明确t(6：：11)(q27：：q23)易位在aml的发生中具有重要作用。同时也有报道在t细胞急性淋巴细胞白血病、慢性嗜酸性细胞白血病中发现t(6::11)(q27::q23)，但是目前为止尚未发现t(6::11)(q25::q23)易位的相关报道。del(11)(q23)染色体改变在骨髓增生异常综合征、特纳综合征、原发性小睾丸征、慢性粒细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓系白血病中被发现。在慢性淋巴细胞白血病中发现存在del(11)(q23)与患者预后不良相关。也报道一例慢性中性粒细胞白血病患者存在del(11)(q23)对羟基脲及阿糖胞苷治疗无反应。但是del(11)(q23)具体作用机制尚不清楚。目前国际上尚未建立起t(6::11)(q27::q23)异常或del(11)(q23)异常的血液肿瘤细胞株，也未建立起同时存在t(6::11)(q27::q23)和del(11)(q23)异常的血液肿瘤细胞株。
4、由于每位患者均具有不同的遗传背景及基因表达特点，肿瘤的不同时期也具有不一样的分子机制。肿瘤细胞株保留了肿瘤的生物学特征，而且可以在体外连续传代培养，可以完成许多体内无法进行的实验，可以克服原代细胞细胞数量有限，不能体外连续长期增殖的弊端。为肿瘤的研究提供了不可替代的细胞工具。因此建立不同时期的cml细胞株，并借助于先进的分子生物学技术，揭示cml的进展，特别是急变的机制，并利用细胞模型及动物模型筛选cml急变的治疗药物，对于进一步提高cml进展后的不良预后具有重要意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一株源于人慢性粒细胞白血病慢性期细胞建立而来的人慢性粒细胞白血病细胞株及其构建方法和应用。
2、本专利技术的目的是通过以下技术方案来实现的：一种人慢性粒细胞白血病细胞株，该细胞株命名为人慢性粒细胞白血病细胞yyxy-m6，于2023年7月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no:c2023219。
3、本专利技术还提供如上所述的人慢性粒细胞白血病细胞株的子代细胞。
4、本专利技术提供的人慢性粒细胞白血病细胞yyxy-m6是由慢性粒细胞白血病慢性期细胞建立，表现为原始细胞形态，bcr-abl基因阴性，为悬浮细胞。
5、本专利技术还提供如上所述人慢性粒细胞白血病细胞株的用途，选自以下任一项或多项：
6、a.用于慢性粒细胞白血病慢性期转急变期的机制研究；
7、b.用于慢性粒细胞白血病急变期后的染色体核型分析为复杂核型，具体为：t(6::11)(q25::q23)、del(11)(q23)及正常核型(46，xx)三种核型的机制研究；
8、c.用于慢性粒细胞白血病急变期后bcr-abl阴性的机制研究；
9、d.制备肿瘤细胞模型或制备肿瘤动物模型；其中，肿瘤细胞模型包括在本细胞株建立起来的子代细胞或在本细胞株建立起来的子代细胞通过转染带荧光标记的基因建立起来的细胞。动物肿瘤模型包括通过皮下荷瘤或尾静脉注射建模的方法，建立的慢性粒细胞白血病的动物模型。
10、e.体外筛选和/或评价/制备肿瘤治疗药物；筛选肿瘤化疗药物的方法可以为：通过向所述人慢性粒细胞白血病细胞yyxy-m6培养基中添加不同治疗药物，观察药物细胞毒性，获得初步有效的候选药物。然后，将候选药物施药于所述细胞，计算筛选出来的有效药物的半数抑制浓度(ic50)，选择ic50最低的药物进一步作用于动物模型，与未施药组动物的存活期、肿瘤大小、转移情况等进行比较，筛选获得潜在的治疗慢性粒细胞白血病的药物。其中，动物模型采用的动物为免疫缺陷小鼠。
11、f.开发肿瘤药物靶点；
12、g.制备肿瘤诊断产品；
13、h.体外筛选肿瘤生物治疗药物/试剂。
14、本专利技术还提供所述人慢性粒细胞白血病慢性期细胞株的构建方法，包括如下步骤：获得新鲜的慢性期慢性粒细胞白血病患者经血细胞分离机分离出来的血液。取5ml分离出来的血液滴加入预先加5ml人外周血淋巴细胞分离液的15ml干净无菌离心管中，离心2000转/20分钟。离心结束后取淋巴细胞分离液与血浆交界处白膜细胞层至新的15ml无菌离心管中，加入5ml无菌4℃预冷的1xpbs重悬细胞，离心2000转/5分钟。然后弃上清，加入5mlimdm完全培养基(imdm 90％本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种人慢性粒细胞白血病细胞株，其特征是，该细胞株命名为人慢性粒细胞白血病细胞YYXY-M6，于2023年7月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2023219。
2.根据权利要求1所述的人慢性粒细胞白血病细胞株，其特征是，所述人慢性粒细胞白血病细胞YYXY-M6是由慢性粒细胞白血病慢性期细胞建立，表现为原始细胞形态，染色体核型分析为复杂核型，具体为：t(6::11)(q25::q23)、del(11)(q23)及正常核型(46，XX)三种核型，BCR-ABL基因阴性，细胞株为悬浮细胞。
3.一种权利要求1所述的人慢性粒细胞白血病细胞株的子代细胞。
4.一种权利要求1-2所述的人慢性粒细胞白血病细胞株或权利要求3所述的子代细胞的用途，其特征是，选自以下任一项或多项：
5.如权利要求4所述的应用，其特征是，所述肿瘤动物模型采用的动物为免疫缺陷小鼠。
【技术特征摘要】
1.一种人慢性粒细胞白血病细胞株，其特征是，该细胞株命名为人慢性粒细胞白血病细胞yyxy-m6，于2023年7月24日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctcc no：c2023219。
2.根据权利要求1所述的人慢性粒细胞白血病细胞株，其特征是，所述人慢性粒细胞白血病细胞yyxy-m6是由慢性粒细胞白血病慢性期细胞建立，表现为原始细胞形态，染色体核型分析为复杂核型，具体为：t(6::11)(q...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆滢，陈冬，李枫林，裴仁治，庄海慧，林青青，袁娇娇，
申请(专利权)人：宁波大学附属人民医院，
类型：发明
国别省市：
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