【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及被动免疫技术开发人用抗体领域，属于防疫领域，特别是一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体及其制备方法。
技术介绍
1、考虑到人类中和抗体的高成本和长开发周期，抗sars-cov-2病毒igy抗体的研究可提供经济且快速的规模化生产和广泛的人群应用的契机。蛋黄抗体igy是igg抗体的进化前体，广泛存在于鸟类、爬行动物和两栖动物中，并且可以很容易的从蛋黄中大规模获得。作为人类食用鸡蛋的一种成分，igy被认为是安全的，并且由于其对抗原的高亲和力结合能力、热稳定性、对ph变化的高适应性和良好的成本效益而被广泛用作呼吸道感染的预防剂。基于igy抗体的这些的优势，从灭活的新冠疫苗免疫的产蛋鸡产的蛋黄中分离、提纯出抗sars-cov-2的igy抗体，并在体外评估其抗体效价和与重组sars-cov-2s1蛋白及和n蛋白的反应性，希望开发出基于被动免疫所产生的igy抗体，作为免疫预防方式或治疗剂来预防或治疗新型冠状病毒感染。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体及其制备方法，以解决上述技术背景中提出的问题。
2、为实现上述目的，本专利技术通过以下技术方案来实现：
3、第一方面，本专利技术提供了一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法，包括如下步骤：
4、s1、新型冠状病毒灭活疫苗(vero细胞)作为抗原免疫产蛋鸡，收集免疫前后不同时间段产蛋鸡所产的鸡蛋；
5、s2
6、s3、卵黄抗体的提取及纯化效果的表征。
7、作为进一步的方案，步骤s1中，采用产蛋鸡翅根肌内注射方式免疫蛋鸡，收集产蛋鸡在免疫前后不同时间段所产的鸡蛋。
8、作为进一步的方案，步骤s2中，使用冻融水稀释法，对igy抗体进行初步的提取，采用硫酸铵沉淀法和透析法对igy抗体进行浓缩和进一步深入的纯化。
9、进一步优选的，在冻融水稀释法中，卵黄溶液冻融温度对igy抗体粗提取的效果存在影响，相同体积卵黄溶液在4℃、-8℃、-20℃和-80℃放置过夜，解冻至室温，离心后，脂质成分大部分可以沉积聚集，上清液颜色及清晰度随着冻融温度降低而逐渐增加。
10、进一步优选的，利用饱和硫酸铵溶液对不同温度处理后得到的水溶性igy提取液进行再浓缩及初步纯化。具体为，向水溶性igy提取液中加入相同体积饱和硫酸铵溶液，过夜浓缩后，可见絮状物沉积，离心后，可收集聚集浓缩的蛋白抗体igy。
11、进一步优选的，对浓缩后的蛋白抗体igy进行透析纯化，具体为用100kda孔径半透膜按3h、4h、6h、过夜、24h的时间间隔对溶液进行透析并使用冷冻干燥机获得igy冻干粉，于4℃储存备用。
12、进一步优选的，提纯后的igy分子的sds-page显示出特征性igy带型，分子量为68kda和22kda，分别代表igy重链和轻链。说明本专利技术对igy提取的方式和优化方案是正确的，高纯度的igy为后续研究其特有的免疫学作用及临床应用提供了保障。
13、本专利技术的技术方案还包括：通过elisa实验检测抗体效价随时间波动情况，卵黄抗体对sars-cov-2病毒重组s1及n蛋白的效价随时间的变化的波动规律。在第1次免疫后抗体效价开始上升，在第3次免疫完成后，抗体效价急剧增加，在第3次免疫完成后2周，卵黄抗体效价达到峰值。
14、第二方面，本专利技术还提供了上述所述抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法所制备的抗sars-cov-2卵黄igy抗体。
15、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
16、1、本专利技术主要介绍了利用igy新技术及其优化技术制备抗sars-cov-2的卵黄抗体igy的具体方法，并检测其免疫学效果，以期为应对未来可能出现的呼吸道传染性疾病等提供一种经济、安全、高效的新方法。
17、2、新冠灭活疫苗作为抗原，优化的冻融水稀释法+硫酸铵沉淀法提取纯化igy抗体(多克隆抗体)，保证了高提取率，降低水的用量，抗体纯度有保障，抗体成分无添加，对抗体活性影响小，igy产量大。强调提取率，强调无添加，强调环保节能高效提取有效抗体成分。
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1.一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中，采用产蛋鸡翅根肌内注射方式免疫蛋鸡，免疫3次，每次间隔时间为2周，收集产蛋鸡在免疫前后不同时间段所产的鸡蛋。
3.根据权利要求2所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，步骤S1中，收集第3次免疫完成后2周的鸡蛋。
4.根据权利要求1所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2中，在冻融水稀释法中，先用苯扎溴铵消毒液消毒鸡蛋，将鸡蛋破壳分离蛋清与蛋黄，用去离子水将蛋黄按去离子水：蛋黄为5:1的比例混合后充分搅拌，然后冻存过夜后于4℃冰箱自然解冻；待溶液完全解冻后，离心收集上清液，将上清液依次用中速滤纸和0.22um孔径过滤器过滤，获得的溶液即为水溶性IgY粗提取液。
5.根据权利要求4所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2中，在冻融水稀释法中，冻存温度
6.根据权利要求4所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2中，饱和硫酸铵沉淀法进行浓缩的方法为：向水溶性IgY粗提取液中加入相同体积饱和硫酸铵溶液，4℃放置8小时或过夜浓缩后，可见絮状物沉积，离心弃去上清液后，可收集聚集浓缩的蛋白抗体IgY；
7.根据权利要求6所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，每个鸡蛋中抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体粗产物的得率为84mg-154mg，硫酸铵溶液沉淀后后每只鸡蛋中IgY抗体的得率为45.98mg-57.36mg，纯化后抗体纯度达到98％及以上。
8.根据权利要求1所述的一种抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法，其特征在于，步骤S2提纯后的IgY分子的SDS-PAGE显示出特征性IgY带型，分子量为68kDa和25kDa，分别代表IgY重链和轻链。
9.权利要求1-8任一项所述抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体的制备方法所制备的抗SARS-CoV-2卵黄IgY抗体。
...【技术特征摘要】
1.一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法，其特征在于，步骤s1中，采用产蛋鸡翅根肌内注射方式免疫蛋鸡，免疫3次，每次间隔时间为2周，收集产蛋鸡在免疫前后不同时间段所产的鸡蛋。
3.根据权利要求2所述的一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法，其特征在于，步骤s1中，收集第3次免疫完成后2周的鸡蛋。
4.根据权利要求1所述的一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法，其特征在于，步骤s2中，在冻融水稀释法中，先用苯扎溴铵消毒液消毒鸡蛋，将鸡蛋破壳分离蛋清与蛋黄，用去离子水将蛋黄按去离子水：蛋黄为5:1的比例混合后充分搅拌，然后冻存过夜后于4℃冰箱自然解冻；待溶液完全解冻后，离心收集上清液，将上清液依次用中速滤纸和0.22um孔径过滤器过滤，获得的溶液即为水溶性igy粗提取液。
5.根据权利要求4所述的一种抗sars-cov-2卵黄igy抗体的制备方法，其特征在于，步骤s2中，在冻融水稀释法中...
【专利技术属性】
技术研发人员：樊明文，曹茜茜，许庆安，贲亚琍，翟荣云，
申请(专利权)人：武汉第一口腔医院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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