【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物化学，具体是一种氨基酸及多肽硫亚胺化的方法及其在制备抗肿瘤多肽偶联药物中的应用。
技术介绍
1、多肽在调节机体各系统、器官、组织和细胞的功能活动以及在生命活动中发挥着重要作用，并且常被应用于功能分析、抗体研究、药物研发等领域。随着生物技术与多肽合成技术的日臻成熟，越来越多的多肽药物被开发并应用于临床。然而膜通透性差、代谢速度快和生物利用度低的缺点制约着多肽药物的发展。多肽修饰是一种设计多肽的重要手段，经过化学修饰的多肽不仅可以维持较高的生物活性，而且能够有效地避免免疫原性和毒性方面的缺点，同时化学修饰可以赋予多肽一些新的优良性能。公开报道的多肽修饰方法有很多(biochemistry，2017,56,3863-3873)，但到目前为止，只报道了两例硫亚胺化的修饰方法(science，2017，355,597-602，j.am.chem.soc.2022,144,27,12476-12487)。其中，前者利用恶氮丙啶对多肽甲硫氨酸位点的氧化还原反应，实现了硫亚胺在多肽的甲硫氨酸位点的引入；后者利用硫亚胺与非天然的苯基硼酸位点的chan-lam偶联反应，实现了硫亚胺在苯丙氨酸位点的引入。然而，这两种方法并不能在其他氨基酸位点引入硫亚胺，不能满足其他氨基酸位点硫亚胺化的需要。硫亚胺是亚砜的单氮杂类似物，其许多衍生物具有重要的生物活性。因此，开发一种在氨基酸或多肽羧基位点引入硫亚胺的新方法对抗肿瘤多肽药物的研发具有重要意义。
技术实现思路
1、基于以上所述，本专利技术的目
2、本专利技术的另一目的是提供采用上述方法制备得到的羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物。
3、本专利技术的再一目的是提供上述氨基酸或多肽硫亚胺化的方法在制备抗肿瘤多肽偶联药物中的应用。
4、为实现其目的，本专利技术采用如下技术方案：
5、一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，具体操作为：在空气氛围中，以氨基酸/多肽-n-苯氧基(1)和双取代二苯二硫醚(2)为原料，以无机碱为添加剂，在有机溶剂中搅拌状态下进行液相反应，反应结束后分离纯化，得到羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物(3)，其反应式(一)如下：
6、
7、上述反应式(一)中，r1为氨基酸或多肽的羧基端，r2任意选自苯基、萘基、卤素取代的苯基、c1-c6的烷基或烷氧基取代的苯基、氨基取代的苯基、酰胺取代的苯基；且氨基酸/多肽-n-苯氧基(1)还可以连接到树脂上进行固相反应。
8、作为本专利技术技术方案的进一步优选，所述固相反应过程为：
9、在树脂中通过多肽固相合成引入侧链用烯丙基保护的谷氨酸或天冬氨酸，待多肽序列合成后，脱除烯丙基保护基并与苯氧胺缩合得到氨基酸/多肽-n-苯氧基，随后将双取代二苯二硫醚和无机碱加入到连接有多肽-n-苯氧基的树脂中，并加入有机溶剂室温反应，反应结束后裂解树脂并经过制备高效液相色谱，即可得到羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物(3)，其一般合成步骤如下：
10、
11、优选地，所述氨基酸/多肽-n-苯氧基(1)、双取代二苯二硫醚(2)、无机碱的摩尔比为1:(0.5～5):(0.1～2)。超出该比例后，反应速度会变慢。
12、优选地，所述无机碱为醋酸铯或碳酸铯。
13、优选地，所述反应溶剂为乙腈、n，n-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜中的任意一种。
14、优选地，液相及固相反应温度为25～40℃，反应温度低于25℃时反应速度会变慢，反应温度超过40℃可能会破坏多肽的结构。液相反应时间为5～24小时，反应时间小于5小时会有原料剩余，导致反应不充分。固相反应时间为24～48小时。
15、优选地，液相反应采用柱层析或制备薄层色谱进行分离纯化。
16、通过上述方法，可以得到羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物，
17、，其结构式如下：
18、
19、其中，r1为氨基酸或多肽的羧基端，r2任意选自苯基、萘基、卤素取代的苯基、c1-c6的烷基或烷氧基取代的苯基、氨基取代的苯基、酰胺取代的苯基。
20、上述氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法可以用于制备抗肿瘤多肽偶联药物；优选地，所述抗肿瘤多肽偶联药物为抗人前列腺肿瘤药物。
21、本专利技术的有益效果在于：
22、1、本专利技术氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法原料廉价、合成简单，反应条件温和，无需惰性气体保护，无需有机或金属催化剂参与催化，操作简便。
23、2、本专利技术底物适用范围广，在液相与固相中均可反应。
24、3、本专利技术构建的方法可应用于抗肿瘤多肽偶联药物制备，其中，硫亚胺的n＝s双键可以作为多肽偶联药物的连接子，在谷胱甘肽环境下可以智能释放药物，为抗肿瘤多肽药物的研发提供了一种新的思路。
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1.一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，在空气氛围中，以氨基酸/多肽-N-苯氧基(1)和双取代二苯二硫醚(2)为原料，以无机碱为添加剂，在有机溶剂中搅拌状态下进行液相反应，反应结束后分离纯化，得到羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物(3)，其反应式(一)如下：
2.如权利要求1所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述固相反应过程为：
3.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述氨基酸/多肽-N-苯氧基(1)、双取代二苯二硫醚(2)、无机碱的摩尔比为1:(0.5～5):(0.1～2)。
4.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述无机碱为醋酸铯或碳酸铯。
5.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述反应溶剂为乙腈、N，N-二甲基甲酰胺或二甲基亚砜中的任意一种。
6.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，液相及固相反应温度为25～40℃，
7.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，液相反应采用柱层析或制备薄层色谱进行分离纯化。
8.一种羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物，其特征在于，所述化合物采用如权利要求1或2中方法制备得到，其结构式如下：
9.如权利要求1或2所述的氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法在制备抗肿瘤多肽偶联药物中的应用，其特征在于，硫亚胺的N＝S双键作为多肽偶联药物的连接子，在谷胱甘肽环境下智能释放药物。
10.如权利要求1或2所述的氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法在制备抗肿瘤多肽偶联药物中的应用，其特征在于，所述抗肿瘤多肽偶联药物为抗人前列腺肿瘤药物。
...【技术特征摘要】
1.一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，在空气氛围中，以氨基酸/多肽-n-苯氧基(1)和双取代二苯二硫醚(2)为原料，以无机碱为添加剂，在有机溶剂中搅拌状态下进行液相反应，反应结束后分离纯化，得到羧基位点硫亚胺修饰的氨基酸或多肽化合物(3)，其反应式(一)如下：
2.如权利要求1所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述固相反应过程为：
3.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述氨基酸/多肽-n-苯氧基(1)、双取代二苯二硫醚(2)、无机碱的摩尔比为1:(0.5～5):(0.1～2)。
4.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述无机碱为醋酸铯或碳酸铯。
5.如权利要求1或2所述的一种氨基酸或多肽羧基位点硫亚胺化的方法，其特征在于，所述反应溶剂为乙腈、n，n-二甲基甲酰胺...
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