【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学，具体涉及一种特异性表位多肽及新冠病毒抗体检测方法和试剂盒。
技术介绍
1、新型冠状病毒(covid-19)的对人类健康造成了严重的威胁。导致此疾病的病毒称为sars-cov-2，是一种有包膜的正链rna新型冠状病毒，能够编码尖峰(s)、包膜(e)、膜(m)和核衣壳(n)结构蛋白、16种非结构蛋白和5-8种辅助蛋白。sars-cov-2感染后出现咳嗽、头痛、呼吸困难、肌痛、发热和严重肺炎等症状。
2、目前在新冠疫苗有效性的评价中，疫苗保护效力，特别是对不同新冠变异株的中和抗体水平是最为关键的评价指标。现有新型冠状病毒中和抗体检测方法中，“金标准”是毒蚀斑减少中和试验，即用真病毒去感染细胞，然后观察接种者或者康复者的血清是否可以阻断病毒与细胞受体的结合，但真病毒中和试验对条件要求十分苛刻，生物安全风险较高，只能在生物安全三级防护(bsl-3)及以上实验室进行，而且非常耗时，通常要2天至4天完成。另一种方法是基于假病毒的中和试验，即将水痘病毒或疱疹病毒等病毒的某个蛋白替换成新型冠状病毒的刺突蛋白(s蛋白)进行中和试验，其可以在生物安全二级实验室(bsl-2)操作，但仍需使用病毒和细胞，通常要3天完成，非常不利于开展大规模检测和评价。
3、因此，亟须建立一种能快速反应，使用操作简单方便，并适用于大规模应用的检测sars-cov-2中和抗体方法，用于快速有效地评估群体免疫水平，为新冠疫苗保护效力的科学数据提供支撑。
技术实现思路
1、本专利技术
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供了一种与中和活性相关的sars-cov-2特异性表位多肽，其氨基酸序列如seq id no.1-5中任一序列所示。
4、本专利技术通过设计和构建一个sars-cov-2多肽微阵列，分析sars-cov-2灭活疫苗诱导的igg和igm抗体应答，筛选出系列抗体中和活性相关的免疫表位多肽，对判断疫苗免疫后中和阳性具有更高的准确度。
5、第二方面，本专利技术提供了一种sars-cov-2特异性抗原，包括如seq idno.1-5中至少一种所示序列的多肽。
6、作为本专利技术所述的sars-cov-2特异性抗原的优选实施方式，包括如seq idno.1和seq id no.5所示序列的多肽。
7、作为本专利技术所述的sars-cov-2特异性抗原的优选实施方式，包括如seq idno.2和seq id no.4所示序列的多肽。
8、作为本专利技术所述的sars-cov-2特异性抗原的优选实施方式，包括如seq idno.1-5所示序列的多肽。
9、第三方面，本专利技术提供了一种新冠病毒抗体检测试剂盒，包被有所述的特异性抗原。
10、作为本专利技术所述的试剂盒的优选实施方式，所述试剂盒为elisa试剂盒。
11、第四方面，本专利技术提供了一种新冠病毒抗体的检测方法，取氨基酸序列如seq idno.1-5中任一序列所示的多肽进行间接elisa检测。
12、作为本专利技术所述的检测方法的优选实施方式，所述间接elisa检测为：将待检血清中的sars-cov-2抗体与固定在elisa板的所述多肽结合，洗涤，加入酶标二抗；通过加入与酶反应的底物后显色，根据酶标仪od450值判断样品中抗体的含量。
13、作为本专利技术所述的检测方法的优选实施方式，所述间接elisa检测为：取所述多肽抗原包被酶标板，孵育；弃包被液，洗板，加入封闭液封闭；洗板，加入所述待检血清，孵育；洗板，加入酶标二抗，孵育；洗板，加入显色液，显色后终止反应。
14、进一步优选的，所述封闭液为含bsa的pbs缓冲液。
15、进一步优选的，所述酶标二抗为hrp-igg抗体。
16、进一步优选的，所述显色液为硫酸溶液。
17、更进一步优选的，所述间接elisa检测的条件为：2.0μg/ml所述多肽抗原包被酶标板，每孔100μl，37℃孵育2h；弃包被液，1×洗液洗板3次，加入200μl5％bsa封闭液，37℃封闭2h；1×洗液洗板3次，加入待检血清，37℃孵育30min1；×洗液洗板5次，加入100μl 1：1500预稀释的hrp-igg抗体，37℃下孵育1h；1×洗液洗板5次，每孔加入100μl tmb显色液，室温下避光反应15min，显色后加入50μl 2m h2so4终止反应。
18、第五方面，本专利技术将所述的特异性表位多肽、所述的特异性抗原、所述的试剂盒在新冠疫苗有效性的评价中的应用。
19、与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
20、本专利技术通过设计和构建一个sars-cov-2多肽微阵列，分析sars-cov-2灭活疫苗诱导的igg和igm抗体应答，筛选出系列抗体中和活性相关的免疫表位多肽，其氨基酸序列如seq id no.1-5中任一序列所示。并在此基础上建立了多肽间接elisa检测试剂盒，该方法灵敏度高，特异性好，重复性和稳定性好，且不需要高等级生物安全实验室，操作简便，结果判断客观，能达到快速评估新冠疫苗抗体水平的目的，为新冠抗体检测方法提供了新的手段和方向。
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1.一种与中和活性相关的SARS-CoV-2特异性表位多肽，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID No.1-5中任一序列所示。
2.一种SARS-CoV-2特异性抗原，其特征在于，包括如SEQ ID No.1-5中至少一种所示序列的多肽。
3.根据权利要求2所述的SARS-CoV-2特异性抗原，其特征在于，包括如SEQ ID No.1和SEQ ID No.5所示序列的多肽；或
4.根据权利要求2所述的SARS-CoV-2特异性抗原，其特征在于，包括如SEQ ID No.1-5所示序列的多肽。
5.一种新冠病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，包被有如权利要求2-5任一项所述的特异性抗原。
6.一种新冠病毒抗体的检测方法，其特征在于，取氨基酸序列如SEQ IDNo.1-5中任一序列所示的多肽进行间接ELISA检测。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述间接ELISA检测为：将待检血清中的SARS-CoV-2抗体与固定在ELISA板的所述多肽结合，洗涤，加入酶标二抗；通过加入与酶反应的底物后显色，根据酶
8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述间接ELISA检测为：取所述多肽抗原包被酶标板，孵育；弃包被液，洗板，加入封闭液封闭；洗板，加入所述待检血清，孵育；洗板，加入酶标二抗，孵育；洗板，加入显色液，显色后终止反应。
9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述间接ELISA检测的条件为：2.0μg/mL所述多肽抗原包被酶标板，每孔100μL，37℃孵育2h；弃包被液，1×洗液洗板3次，加入200μL 5％BSA封闭液，37℃封闭2h；1×洗液洗板3次，加入待检血清，37℃孵育30min；1×洗液洗板5次，加入100μL 1：1500预稀释的HRP-IgG抗体，37℃下孵育1h；1×洗液洗板5次，每孔加入100μL TMB显色液，室温下避光反应15min，显色后加入50μL 2M H2SO4终止反应。
10.权利要求1所述的特异性表位多肽、权利要求2～4任一项所述的特异性抗原、权利要求5所述的试剂盒在新冠疫苗有效性的评价中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种与中和活性相关的sars-cov-2特异性表位多肽，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.1-5中任一序列所示。
2.一种sars-cov-2特异性抗原，其特征在于，包括如seq id no.1-5中至少一种所示序列的多肽。
3.根据权利要求2所述的sars-cov-2特异性抗原，其特征在于，包括如seq id no.1和seq id no.5所示序列的多肽；或
4.根据权利要求2所述的sars-cov-2特异性抗原，其特征在于，包括如seq id no.1-5所示序列的多肽。
5.一种新冠病毒抗体检测试剂盒，其特征在于，包被有如权利要求2-5任一项所述的特异性抗原。
6.一种新冠病毒抗体的检测方法，其特征在于，取氨基酸序列如seq idno.1-5中任一序列所示的多肽进行间接elisa检测。
7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述间接elisa检测为：将待检血清中的sars-cov-2抗体与固定在elisa板的所述多肽结合，洗涤，加入酶标二抗；通过加...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆家海，廖聪慧，王瑾，张亚丽，李伊凡，
申请(专利权)人：中山大学，
类型：发明
国别省市：
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